1樓:匿名使用者
看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度
實時螢光定量pcr曲線怎麼分析
2樓:龍鳳油洺月
看螢光背景;
看擴增曲線形態(s);
看ct值;
靠擴增效率、
實時螢光定量pcr可以用來精確測定dna濃度嗎
3樓:北京索萊寶科技****
實時螢光定量pcr不是用來測濃度的,可以用來做基因的拷貝數。但是如果你的產物單一,有相應的標準品,也是可以測濃度的,濃度的準確性和你的標準曲線相關。
實時螢光定量pcr:
精確測定dna濃度的方法:
dna純度和濃度的檢測:分光光度(紫外吸收)法
1.預熱紫外分光光度計10-20分鐘。
2.取所需的比色杯(4ml),其中乙隻裝入3 mlh2o溶液,作為空白液,用來校正分光光度計零點及調整透光度至100。
3. dna純度及濃度的測定:
①取3微公升的dna樣品加入比色杯,加dh2o至3000微公升,混勻。
②將比色杯置入分光光度計中,調入射光波長,分別用空白溶液調整零點(t為100,od為0),測待測樣品在260nm、280nm、230nm的od值。
③計算濃度:
dna濃度(ug/ml)=a260×50ug/ml×稀釋倍數
對於雙鏈dna 1.0 od260=50 ug/ml
對於單鏈rna 1.0 od260=40 ug/ml
4. 純的dna溶液其od260/od280應為1.8,od260/od230應大於2.0。
⑴ od260/od280大於1.9時,說明有rna汙染,小於1.6時表明有蛋白質或酚汙染。
4樓:xiaoxiao流沙包
螢光定量分為 絕對定量 和相對定量
我之前做的都是相對定量
絕對定量應該可以吧
實時螢光定量pcr,溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
5樓:南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷,整個實驗設計還可以!你做相對定量嗎,將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了! 如果絕對定量,需要進一步實驗吧!
6樓:為青生物
溶解曲線的單峰明顯,橫座標在80度以上,一般就是pcr產物
螢光定量pcr和實時螢光定量pcr還有反轉錄pcr都是什麼呀?有什麼區別,分別是什麼作用啊?謝謝啊
實時就是指每個階段的螢光都有收集,其實現在所有的螢光定量pcr儀器都是實時的。螢光定量pcr的英文簡寫是 fq pcr,f是螢光的縮寫,q是定量的縮寫。或者寫成是rt pcr。rt就是realtime的縮寫 做定量pcr的目的是為了了解起始模板數的量,這個一下寫不清楚,你看乙個說明書絕對看得懂。而反...
螢光定量pcr的標準曲線怎麼跑,請問做實時螢光定量PCR實驗時,為什麼做標準曲線?
採用相對法定量要求必須目的基因和內參具有相同的擴增效率,所以需要做efficiency curve如果得到的斜率小於0.1,可以採用相對法,否則,需要重新設計能達到相同擴增效率的引物,或者就需要製作標準曲線,製作標準曲線,可以將基因片段轉殖到質粒,然後體外轉錄成rna,定量以後合成cdna,然後按比...
請問B肝HBV DNA實時螢光定量PCR檢測結果2 47E
就是說你現在一毫公升血裡有24700000個B肝病毒,而正常的是100個 這是病毒複製量,2.47乘以10的8次方。比較高。hbvdnaB型肝炎病毒測定結果7.029e 07 5.000e 02是什麼意思?B肝病毒hbv dna定量 檢測方法,實時螢光定量pcr 結果7.82e 02 最低檢測下限5...