1樓：匿名使用者
實時就是指每個階段的螢光都有收集，其實現在所有的螢光定量pcr儀器都是實時的。螢光定量pcr的英文簡寫是：fq-pcr，f是螢光的縮寫，q是定量的縮寫。
（或者寫成是rt-pcr。rt就是realtime的縮寫）。
做定量pcr的目的是為了了解起始模板數的量，這個一下寫不清楚，你看乙個說明書絕對看得懂。
而反轉錄pcr就是把mrna反轉錄成cdna，簡寫也是rt-pcr。不過和上面的不同！這個rt是reverse transcript的縮寫！
其實啊，對於做表達量的實驗而言，反轉錄pcr是螢光定量pcr的第一步，很多人是這麼來描述的：rt-qpcr。這個rt就是反轉錄，這個q是指定量。
總之，自己好好看說明書！
2樓：匿名使用者
螢光定量pcr的全稱就是實時螢光定量pcr，是通過螢光值的變化來實時監測每個反應過程中目標產物的累積量，可以絕對定量也可以相對定量。反轉錄pcr是將mrna反轉錄成cdna後做的pcr，可以是普通pcr，也可以用螢光定量pcr
pcr和實時螢光定量pcr這兩種有什麼區別
3樓：
原理不同：螢光定量pcr實時監測與dna結合的螢光染料激發的螢光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量,一般是紫外光.
反應要求：螢光定量對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段.如果不需要檢測產物分子量大小,螢光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析,普通pcr必須電泳.
結果：螢光定量可以實現精確定量,普通pcr則不行.螢光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通pcr無法實現的.
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛,希望可以幫到你
4樓：汗耕順閔凰
螢光原位雜交和螢光定量pcr有什麼區別
實時螢光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入螢光基團，利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時螢光定量pcr的不同，是不同在實時螢光定量pcr的系統中加入了螢光染料（sybr
green
或taqman
探針等等）。以sybr
green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，螢光染料結合也越多，螢光也越強。在機器中有乙個探測螢光的探頭，可以定量檢測螢光的強度，轉換成數值。這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
螢光pcr更有優勢，因為螢光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
pcr,rt-pcr,實時螢光定量pcr的區別與聯絡
5樓：永恆的瞬間綻放
1、所說的pcr應該就是最常規的pcr，以dna為模板，通過上下游引物，實現dna的擴增。
2、rt-pcr一般情況下是指反轉錄pcr（reverse transcription），儘管有些資料上說實時螢光定量pcr也（realtime fluores-cence quantitative pcr）也簡稱rt-pcr，但是這是不對的，不推薦。
基本操作過程是將所提取的rna進行反轉錄，然後將所獲得的cdna作為模板，設計引物進行擴增，是一種檢測基因表達的常用方法。
3、實時螢光定量pcr也就是real-time pcr，其最大的作用是檢測樣品中的初始dna濃度。
至於三者的關係，rt-pcr和實時定量pcr應該都屬於pcr，在rna實驗中，這二者都會應用到。
例如你要比較2個組織中的某基因的表達差異，首先你要提取2個組織的總rna，然後通過rt-pcr檢測該基因是否在2個組織中有表達，然後通過實時定量pcr測定該基因在2個組織中的表達量是否具有顯著性差異。
擴充套件資料：
pcr原理
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是，dna聚合酶在高溫時會失活，因此，每次迴圈都得加入新的dna聚合酶，不僅操作煩瑣，而且**昂貴，制約了pcr技術的應用和發展。
耐熱dna聚合酶-taq酶的發現對於pcr的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個迴圈加酶，使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，pcr技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：dna模板-引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈，重複迴圈變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，
而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成乙個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
實時螢光定量pcr與基本pcr相比有什麼優點
6樓：杏雀烈
螢光定量pcr與普通pcr相比具有以下優點：
1、高靈敏性 可檢測單個細胞基因；
2、高特異
7樓：匿名使用者
普通的pcr大多數是定性實驗，而實時螢光定量pcr則定量和定性都可以做。應用領域也不一樣，普通pcr一般應用於基因組轉殖、dna測序、rna反轉錄等，而實時螢光定量pcr一般應用於mrna表達量分析、絕對定量、蛋白表達、snp分析、陰陽性解析等領域。不是定量pcr比pcr好，而是兩者應用與不同的領域，起到了不同的作用。
螢光定量pcr較普通pcr不同的一點就是可以實時檢測pcr擴增產物，從而可進行絕對定量或者相對定量。
8樓：奔馬的香香豬
pcr實驗主要採用sybr green染料法和taqman探針法，biog技術採用經化學修飾的熱啟動聚合酶，有效避免了非特異擴增，具有高度的特異性。反應緩衝液經多次優化，與熱啟動聚合酶具有最為樂觀的搭配，使聚合酶的活性能夠得到最大程度的發揮。反應靈敏快速，40個迴圈只需20多分鐘的時間。
在20ul的反應體系裡，只要有幾個拷貝的dna分子就能被檢測出來。
實時螢光定量pcr與普通pcr的區別是什麼？結果有何異同？能說明的問題是什麼？
9樓：麼破1自我
二者結果相同。都能說明生物體外的特殊dna複製的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。
區別：1、二者系統組成不同
螢光定量pcr儀比普通的pcr儀多了螢光訊號採集系統和計算機分析處理系統。
2、二者原理不同
螢光定量pcr實時監測與dna結合的螢光染料激發的螢光，普通ocr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量。
3、二者反應要求不同
螢光定量pcr對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通pcr可以擴增長點的片段。
4、二者應用不同
螢光定量pcr主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的，普通的pcr儀是做定性分析和擴增基因片段，定量pcr儀可以做普通pcr儀的工作，反之不行。
5、二者測量成本不同
定量pcr儀**較為昂貴，普通的基因擴增儀(pcr儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是**要低很多，而且執行成本也要低很多。
實時螢光定量pcr技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的侷限，實現了每一輪迴圈均檢測一次螢光訊號的強度，並記錄在電腦軟體之中，通過對每個樣品ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。
10樓：匿名使用者
原理不同：螢光定量pcr實時監
測與dna結合的螢光染料激發的螢光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量，一般是紫外光。
反應要求：螢光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小，螢光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通pcr必須電泳。
結果：螢光定量可以實現精確定量，普通pcr則不行。螢光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通pcr無法實現的。
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛，希望可以幫到你
11樓：匿名使用者
所謂實時螢光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入螢光基團，利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行「定量分析」的方法。
記住，實時螢光定量是定量分析
12樓：匿名使用者
螢光pcr是為了測量mrna表達量的 普通pcr是為了擴增目的片段的
13樓：匿名使用者
螢光定量是定量的，普通pcr是定性的，結果乙個是說明含有多少，另乙個說明有還是沒有，前者更精確一點
實時螢光定量pcr和定量pcr有什麼區別
14樓：匿名使用者
實時螢光是反應螢光數值定量，普通那種是通過條帶半定量，現在做半定量的已經很少了，除非是一些驗證試驗必須要圖的
螢光定量pcr的相對定量怎麼用,螢光定量PCR的相對定量怎麼用
管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。然後根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每乙個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取rna以後用dnase處理樣品。如果不放心，可以拿處理過的rna做膜版，跑一次，如果有帶就是有汙染，如果沒有可...
請問B肝HBV DNA實時螢光定量PCR檢測結果2 47E
就是說你現在一毫公升血裡有24700000個B肝病毒，而正常的是100個 這是病毒複製量，2.47乘以10的8次方。比較高。hbvdnaB型肝炎病毒測定結果7.029e 07 5.000e 02是什麼意思？B肝病毒hbv dna定量 檢測方法，實時螢光定量pcr 結果7.82e 02 最低檢測下限5...
普通RTPCR與實時螢光定量PCR的引物有什麼區別
區別 如果rt pcr的擴增產物只有1,200bp，而且足夠保守可以定位螢光pcr的目的基因 那就可以通用 實時定量的引物設計要求比較高,可以按普通引物設計的方法來做,但是設計時要注意擴增的片段不能太大,最好在250bp 100bp之間.同時要保證這對引物有絕對的特異性,因為要是產生非特異性擴增的話...