1樓:北京索萊寶科技****
管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。
然後根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每乙個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取rna以後用dnase處理樣品。
如果不放心,可以拿處理過的rna做膜版,跑一次,如果有帶就是有汙染,如果沒有可以合成cdna庫了。
我想問一下螢光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量時結果的標準差是如何計算的
2樓:匿名使用者
這個很簡單啊。你做了一次實驗,得到的樣本做了一次pcr,得到了一次的相對定量(設對照組為1)。然後重新做實驗,再做pcr,又得到一組,這樣至少重複3次,就有3組相對定量了。計算標準差
對照組的標準差:取對照組的平均ct值設為1, 3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量,可以算出對照組的標準差。
我想問一下螢光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題
3樓:
做了乙個實驗,內部參考電壓可以得到幾個ct值,會得到多個目標基因。在這種情況下,根據ct值的平均值,將得到的比率(相對量)。
實驗肯定不是唯一的一次,至少重複3次。這將是乙個倍數的3個或更多,得到。 3個以上的值,你可以計算平均值和標準偏差的。
4樓:匿名使用者
三次獨立實驗,每次至少三個重複,統計結果自然就是那樣了。
5樓:塔渟盛淑賢
你一次實驗做的資料,內參可以得到幾個ct值,目的基因也會得到幾個。這樣的話,根據平均的ct值,就會得到乙個倍數(相對量)。
實驗肯定不會只做一次吧,至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。
螢光定量pcr實驗相對定量法中的rq代表什麼意義
6樓:北京索萊寶科技****
rq:relative quantity,相對表達量
rq min和rq max是置信區間,計算有點複雜,一般用不到,做圖一般用均值加標準差。
螢光定量pcr儀,請問我是選相對定量還是絕對定量做
7樓:南京金益柏生物科技****
可以的。你把內參和目的基因都設成unknown,然後輸出資料,得到內參和目的基因的ct值。按照公式2-△△ct計算fold change就可以了。
就是有點麻煩,得自己算。我也是用abi7300絕對定量軟體做的相對。
實時螢光定量pcr中的絕對定量怎麼做
8樓:匿名使用者
用已知濃度的dna樣本(通常是質粒)梯度稀釋成一系列的樣本。做實驗的時候,這些標準品和待測樣本加在同樣一塊96孔盤的不同孔內。一起做pcr。
標準品的螢光強度和已知的濃度作圖,可以得到一條標準曲線。而待測樣本的螢光強度測出以後,就可以在標準曲線上算出樣本濃度了。
9樓:奔馬的香香豬
在pcr反應體系中加入螢光基團,利用螢光訊號積累實時監測整個pcr程序,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。隨著pcr反應的進行,pcr反應產物不斷累計,螢光訊號強度也等比例增加。我們實驗室用biog-pcr技術測得的擴增曲線起跳值一般在30左右,每經過乙個迴圈,收集乙個螢光強度訊號,這樣我們就可以通過螢光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條螢光擴增曲線圖。
螢光定量pcr和實時螢光定量pcr還有反轉錄pcr都是什麼呀?有什麼區別,分別是什麼作用啊?謝謝啊
實時就是指每個階段的螢光都有收集,其實現在所有的螢光定量pcr儀器都是實時的。螢光定量pcr的英文簡寫是 fq pcr,f是螢光的縮寫,q是定量的縮寫。或者寫成是rt pcr。rt就是realtime的縮寫 做定量pcr的目的是為了了解起始模板數的量,這個一下寫不清楚,你看乙個說明書絕對看得懂。而反...
螢光定量PCR引物設計的問題
ls說得很對 你可以手動改動幾個鹼基,降低引物裡面的dimer,主要是3 端沒有dimer就好。錯配問題,可以用taqman探針來檢測,但是很貴,實在設計不出來再用。可以多設計幾對,然後做個引物測試,挑選出幾對好的,再做qrt。你是直接用primer5設計的引物嗎?有時候時會遇到你說的問題,你可以在...
螢光定量PCR檢驗報告結果怎麼看
你的B肝病毒檢驗結果是64700000 iu ml 病毒量大傳染性強,複製活躍。病毒量有點高,到相應科室在醫生指導下進行抗病毒 1.0x10 3 iu ml即dna陰性即可 原來是32900000,現在是5680 肯定是好轉了 肝功能如果就那項高一點點,其他都正常的話可以說是肝功能正常現在就這麼辦,...