1樓：瀟灑的熱心網友
採用相對法定量要求必須目的基因和內參具有相同的擴增效率,所以需要做efficiency curve如果得到的斜率小於0.1,可以採用相對法,否則,需要重新設計能達到相同擴增效率的引物,或者就需要製作標準曲線,製作標準曲線,可以將基因片段轉殖到質粒,然後體外轉錄成rna,定量以後合成cdna,然後按比例稀釋後做出標準曲線,或者可以採用乙個一直***的rna樣品,如細胞株,然後以此為標準製作.如果直接採用dna做標準,那前提是rna逆轉錄的效率一致.
請問做實時螢光定量pcr實驗時，為什麼做標準曲線？
2樓：匿名使用者
1 做標曲才可以算出這對引物的擴增效率（其斜率），方便用pfaffl方法來進行相對定量（得到的結果相對精確一點），否則只能預設擴增效率為2，用2^-ddct(livak)法來計算
2 做標曲才可以絕對定量。
3樓：匿名使用者
標準曲線是已知量的
做了標準曲線可以實現絕對定量
4樓：匿名使用者
絕對定量和相對定量都可以做標準曲線，目的在於用已知濃度樣品的量做成的標準曲線來定未知濃度樣品的量。
請問做螢光定量pcr時每次都需要做標準曲線嗎？謝謝！
5樓：匿名使用者
絕對定量只要做乙個就行。
相對定量：△△ct法，只用做一次，把目的基因和內參基因的斜率都調整到-3.32左右，兩者相差不超過0.
1，同時r2≥0.99。則之後就可以不用再做了。
不用，標準曲線法需要每次都做！
6樓：百浩生物
有時候感覺是說了廢法，當然是每次都做標準曲線結果更好了。不過如果你邊著做，並且樣品是同一批配的，這個影響不大，上一批的標準曲線可以用於下一批的。
怎麼判斷實時螢光定量PCR標準曲線是否準確
看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度 實時螢光定量pcr曲線怎麼分析 看螢光背景 看擴增曲線形態 s 看ct值 靠擴增效率 實時螢光定量pcr可以用來精確測定dna濃度嗎 實時螢光定量pcr不是用來測濃度的，可以用來做基因的拷貝數。但是如果你的產物單一，有相應的標準品，也是可以測濃度的，濃度的準...
螢光定量pcr的相對定量怎麼用,螢光定量PCR的相對定量怎麼用
管家基因是用來定量的。用來計算相對表達量。管家基因在相同量樣品中的表達量我們認為是一致的。然後根據這個量來計算你的基因在不同樣品中的表達量。所以每乙個都需要單獨的樣品。基因組干擾需要你在提取rna以後用dnase處理樣品。如果不放心，可以拿處理過的rna做膜版，跑一次，如果有帶就是有汙染，如果沒有可...
螢光定量PCR擴增曲線基線過高什麼原因
rox加多了,終濃度太高?或者模板量,pcr擴增效率低下?模板量的問題,改一下試試 你的背景太高了,降低探針用量 螢光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題 在螢光法定量pcr中溶解曲線直接表示了引物的特異性,如果是單一的峰,那麼我們要看的是tm值在 通常情況下都是80 90之間,如果太小那可能擴增出來...