1樓：之何勿思
pbs稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋，再加一點tritonx100效果好。
培養液成分太多了。而且固定之後細胞都死了，用培養液沒什麼意義，只要保證其ph等條件適合就好了。
抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下，有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有，依抗體而定。可以4度過夜，這樣染色效果好。
二抗一般較便宜，一般1：50到1：200多。
免疫螢光的一抗核二抗分別用什麼稀釋
2樓：匿名使用者
pbs稀釋.當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點tritonx100效果好.
培養液成分太多了.而且固定之後細胞都死了,用培養液沒什麼意義,只要保證其ph等條件適合就好了.
抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數.上網查一下,有很多protocol.一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定.可以4度過夜,這樣染色效果好.
二抗一般較便宜,一般1：50到1：200多.
免疫螢光染色gs是一抗還是二抗
3樓：魅力啄木鳥
免疫螢光染色快捷,靈敏.
標本冰凍切片,石蠟切片?切片厚薄?影響抗孵育間.
選用較佳抗工作濃度.
二抗需a液b液室溫混合15鐘再用.
標本需儲存-20度.
免疫螢光標記為什麼不直接標記一抗而標記二抗？
4樓：e拍
因為一種一抗只識別一種底物，如果每種一抗都需要螢光標記，那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗結合，又帶有可以被檢測出的標記（如帶螢光、放射性、化學發光或顯色基團），作用是檢測一抗，提高了通用性。
一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體，即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團（底物和二抗）。
擴充套件資料
免疫螢光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。coons等於2023年首次採用螢光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。
主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程式也還比較複雜。
螢光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，螢光免疫法無放射性汙染，並且大多操作簡便，便於推廣。國外生產的tdm用試劑盒，有相當一部分即屬於此類，並且還有專供tdm螢光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
由於一般螢光測定中的本底較高等問題，螢光免疫技術用於定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的螢光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，在臨床檢驗中應用。
5樓：匿名使用者
螢光基團可以直接標記一抗，許多抗體公司都有螢光標記的一抗**。但是這樣成本高，一抗有成千上萬種，如果每種一抗都需要螢光標記，那使用起來非常不方便。所以通行的做法是標記二抗，而二抗的抗原則是一抗的igg，比如二抗可以標記兔抗鼠igg，那麼所有**於鼠的一抗就都可以用這個二抗進行檢測，提高了通用性。
免疫螢光雙標兩種一抗可以一起加嗎
6樓：北京索萊寶科技****
一抗種屬不同的情況下，免疫螢光雙標兩種一抗可以一起加：
容易起交叉反應的是二抗，因為二抗會對igg有反應。而一抗是針對特異蛋白表位的。並不是針對igg的。
免疫螢光實驗方法（連續雙標法）
石蠟切片
1)烘片
▷在60℃烘箱放置2-4小時，使蠟流失。
2)脫蠟、脫水
▷二甲苯溶液中脫蠟，2次，每次5min
▷100%乙醇，2次，每次3min
▷95%乙醇，1次，每次3min
▷90%乙醇，1次，每次3min
▷85%乙醇，1次，每次3min
▷h2o，1次，每次3min
3)固定
▷樣本切片在冰的甲醇中放置10min (甲醇溶液在-80℃預冷)
▷用冰的pbs溶液洗2次，每次3min (pbs溶液在-20℃短暫預冷)
4)透化
▷用含0.25%triton x-100的pbs孵育石蠟切片10min (200mlpbs+500ul triton x-100)
▷用pbs溶液洗3次，每次5min
5)第一螢光標記
▷用pbst配置1%的bsa封閉液，將切片在封閉液中孵育1h
▷4℃冰箱，一抗過夜
▷用槍吸走一抗液體，pbs溶液洗3次，每次5min
▷二抗室溫1h
▷用槍吸走二抗液體，pbs溶液洗3次，每次5min（避光條件下進行）
6)第二螢光標記
▷4℃冰箱，一抗過夜
▷用槍吸走一抗液體，pbs溶液洗3次，每次5min
▷二抗室溫1h
▷用槍吸走二抗液體，pbs溶液洗3次，每次5min（避光條件下進行） 7)dapi對比染色
▷2µg/ml的dapi，15min
▷用pbs沖洗3次
8)封片
▷用移液槍吸中性樹脂一小滴，蓋上蓋玻片，用指甲油塗抹邊緣，待風乾後顯微鏡照相
如何選擇一抗，二抗！如何選擇實驗需要的抗體！最優回答！
7樓：匿名使用者
如何選擇 一抗 二抗！ 你真是問對人了！我現在就告訴你如何選擇實驗需要的抗體！最優回答注意看哦！
1. 一抗選擇
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、別名、亞型等資訊。
（2）確定您的實驗型別，elisa，wb，ihc，icc，或者是facs。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗型別，如果抗體說明書沒有提及的應用型別，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用型別，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
（3）確定實驗樣本的種屬，human，mouse，rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種，可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗需要的抗體。
（4）樣本抗原蛋白的結構性質。了解樣本抗原蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多轉殖抗體的選擇。一般單轉殖抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多轉殖抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
2. 二抗選擇
（1）種屬**。主要根據一抗種屬**而決定二抗**，如一抗是小鼠**，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標記物的選擇。有hrp、biotin、螢光素等標記物。免疫組化，wb二抗主要選擇hrp，biotin標記的二抗，而免疫螢光染色可按實驗需要選擇不同螢光素標記的二抗，如fitc、cy3、pe等。
詳情可搜尋博歐特生物
請教免疫螢光雙標中螢光二抗的選擇是否合適？
8樓：南京金益柏生物科技****
一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮：
1.二抗應選用與使用的一抗相同的物種**;
2.二抗需與一抗的類別或亞類相匹配.這通常是針對單轉殖抗體而言.多轉殖抗體主要是igg類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗igg抗體;
3.一般來說,不同的種屬**與二抗的質量沒有必然的聯絡,**於山羊的二抗與**於驢的二抗在一般的實驗裡沒有太多的差別.然而在一些特殊的實驗裡, 如雙標實驗裡,如果其中乙個一抗是山羊**的,乙個是小鼠**的,則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠**的.
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