做western blot一抗二抗怎麼選？新手求有經驗的大神

1樓：匿名使用者

首先查文獻，看有沒有相關人做過相應的蛋白，其次去幾個大的國際化試劑公內司**容查有沒有商業化的抗體。。如果都沒有，就只能自己做了。。一抗一半是來自老鼠，那麼二抗就可以選擇針對鼠源的抗體，並且二抗看你需要什麼顯色方式，hrp或者是ap的。。。

2樓：anyuan在路上

1、首先看你做的動物是人、大鼠、小鼠、還是兔等等？確定好這個之後，在購買一回抗的時候，就要選擇抗以上

答這些種屬的抗體。

說簡單一點，比如：你的實驗動物是大鼠。那麼一抗就應該是某某抗大鼠，某某就是你一抗的種屬**（host species），假如你的一抗是兔**的，也就是兔抗大鼠，二抗就應該是某某抗兔，一般常見的是山羊抗兔的二抗。

明白了麼？

抗體在乙個實驗過起著關鍵的作用，一抗二抗一定要選對，要不然其他的操作都是徒勞。

westernblot的一抗和二抗都可以用多轉殖抗體嗎

3樓：匿名使用者

western blot的一抗和二抗都

來可以用多轉殖

源抗體不過多轉殖抗體因為有bai

多個結合位點du，事實上的zhi特異性並不如單dao轉殖抗體，所以一般western blot都盡量要求使用單轉殖抗體。以保證實驗結果準確可靠

western一抗和二抗的稀釋倍數一般是多少？

4樓：匿名使用者

一般抗體bai的說明上，都du給出了乙個範圍，zhi

一抗為1:200-2000，二抗為1:1000-10000。

western blot 的原dao理：本質是抗原抗體回反應。第一抗體就是能和非答抗體性抗原(特異性抗原)特異性結合的蛋白。

種類包括單轉殖抗體和多轉殖抗體。第二抗體是能和抗體結合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的訊號。

5樓：匿名使用者

一般根據抗體的特異性和親和度。一抗的濃度範圍比較大，從1:200到1:

1000都有，這個要多做幾次才能確定。二抗的稀釋倍數打，一般用1:5000到1:

10000就可以了。

6樓：賽智創業

一般抗體的說明上，都給出了乙個範圍，可以以這個範圍為根據摸索。一般一抗為1:200-2000，二抗為1:1000-10000.

希望我的回答對您有幫助。

請教一下各位western blot孵完一抗忘了清洗就直接孵二抗會有什麼後果？謝謝啦

7樓：匿名使用者

相當於延長了孵育一抗的時間，一部分二抗被多餘的一抗結合浪費，版由於未清洗一抗權並未結合在膜上在二抗孵育清洗時也會洗掉，但是很可能會使你應該與二抗結合的一抗接觸不到二抗或不均勻，造成條帶不清異常，還有較強的非特異背景

western blot的一抗、二抗可以重複用麼？一般可以用幾次？

8樓：

儲存得當的話，一抗工作液可重複利用2-3次一般不影響效果，但也不絕對，主要是看你的抗體本身如何，如果第一次做出來效果就不理想就不提倡這麼做了。二抗還是算了吧！那麼便宜，扔了不可惜。