1樓:匿名使用者
1.漂洗血清蛋白h7.2-7.4 37度 pbs 2小時.
2.-20度甲醇固定20分鐘後,自然、乾燥 10分鐘3.pbs洗淨:3min*3
4.1%triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpbs
5.pbs洗淨:2*5min
6.羊血清版
封閉:37度,
權20分鐘
7.一抗,4度過夜,一般要大於18小時或者37度 1-2小時8.4度 pbs洗淨,3min*5次
9.二抗 37度小於一小時
求助 細胞免疫螢光的詳細操作步驟
2樓:匿名使用者
1,取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿裡,pbs洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。
2,4%多聚甲醛固定20分鐘,pbs洗三遍。
3,0.2%triton x 100通透10分鐘,pbs洗三遍。
4, 與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘,pbs洗三遍。
5.,一抗4度濕盒內過夜,也可37度2小時,感覺前者效果好,pbs洗三遍。
6,二抗室溫2小時,或者37度1半小時,pbs洗三遍。
7,最好用dapi染核,然後直接照螢光片。
8,蒸餾水洗掉pbs,甘油封片,指甲油封**的四周。
如何做懸浮細胞的免疫螢光
3樓:匿名使用者
正常,wb檢測限本來就靈敏,免疫螢光做不出來原因很多。首先你要確定你蛋白表達的水平,皮克級還是納克級?再確定免疫螢光的檢測限,然後再一步一步分析原因。
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免疫螢光染色的詳細步驟及應注意的細節
4樓:南京金益柏生物科技****
免疫螢光染色方法快捷,靈敏.
標本是冰凍切片,還是石蠟切片?切片的厚薄?影響到一抗孵育的時間.
選用較佳的一抗的工作濃度.
二抗需a液b液在室溫混合15分鐘後再用.
標本需儲存在-20度.
如何做懸浮細胞的免疫螢光,如何做好免疫螢光
正常，wb檢測限本來就靈敏，免疫螢光做不出來原因很多。首先你要確定你蛋白表達的水平，皮克級還是納克級？再確定免疫螢光的檢測限，然後再一步一步分析原因。高保真生物技術 實驗整體外包服務商 細胞免疫螢光，求助 細胞爬片免疫螢光實驗步驟 第一天 1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用pbs浸洗3次，每次3mi...
免疫螢光結果怎麼表達,求助免疫螢光的結果分析
這個比較省事兒的是用組織晶元做免疫組化，直接打分。比單張的組織切片更有說服力。求助免疫螢光的結果分析 可以用image pro plus分析灰度 免疫螢光的標本怎麼製作 免疫螢光的標本製作的基本程式和dab顯色的組化類似 1 免疫螢光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其它相同2 免疫螢光的二抗使...
細胞免疫螢光染色封閉時間長短對結果有何影響
是封閉可以非特異性結合蛋白質的位點，也就是減少抗體 一抗和2抗都是蛋白質 的非特異性結合。細胞鑑定是免疫螢光還是免疫組化 免疫組化和免疫螢光都是蛋白定位的檢測 也就是確定蛋白是表達在細胞核 漿 膜 免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈...