1樓:艾柏森生物
重組人溶菌酶工業化純化工藝,包括如下步驟:
1)樣品預處理,使用適當的方法去除含有重組人溶菌酶發酵培養液中的固體雜質;
2)利用連續流離心分離機進行發酵液的固液分離,收集發酵培養液上清;
3)用預冷的純化水調整上清液的電導,控制在的範圍;
4)柱平衡:用20mmol/l ph為的磷酸緩衝液平衡層析柱。
5)以每分鐘50-150ml的流速平衡3-7個柱體積,通過紫外檢測的方法保證層析柱以平衡至基線;
6)上樣:將電導為為的樣品通過預先用緩衝液平衡好的層析柱;
7)樣品指含有重組人溶菌酶的酵母菌培養液上清;
8)層析柱由上海滬西分析儀器廠****生產,φ10×40cm
9)層析介質指採用的介質是顆粒大小為45-165μm的強陽離子瓊脂糖凝膠,由上海業力生物科技****生產,商品名為sp aogarose fast flow;
10)清洗:用含有氯化鈉的20mmol/l ph為的磷酸緩衝液清洗層析柱,2-3個柱體積,將所有未結合雜質沖洗出層析柱;
11)再平衡:用20mmol/l ph為的磷酸緩衝液平衡層析柱,2-3個柱體積;
12)洗脫:用含有氯化鈉的20-30mmol/l ph為的磷酸緩衝液將蛋白從層析柱上洗脫,並收集洗脫峰;
13)收集的洗脫峰蛋白經超濾的方法脫鹽,得到重組人溶菌酶純蛋白樣品;
14)樣品加入適當的保護劑後,經微孔濾膜除菌過濾;
15)用凍乾的方法制成無菌凍乾粉。
2樓:pear肉
重組人溶菌酶基因轉殖。
發酵。提取純化。
重組人溶菌酶到底是什麼啊?
3樓:網友
你好,重組人溶菌酶(recombinant human lysozyme)是利用基因重組磨脊野技術得到的人源性的高純度人源性溶菌酶。
重組人瞎喊溶菌酶全稱為1,4-β-n-溶菌酶或者稱粘肽n-乙醯基胞壁醯水解酶。它能切斷細菌細胞壁的肽聚糖中n-乙醯葡萄糖胺和n-乙醯胞壁酸之間的β-1,4糖苷鍵的聯結,破壞肽聚糖支架,細菌在內部滲透壓的作用下細胞脹裂開,引起細菌裂解。人和動物細胞無細胞壁結構亦無肽聚糖,故溶菌酶對人體細胞無毒性作用。
同時重組人溶菌酶在體內近於中性的ph環境下帶有大量正電荷, 可與帶負電荷的病毒蛋白直接作用, 和dna、rna、脫輔基蛋白形成複鹽, 使侵入體野桐內的病毒失活。
利用基因工程生產出的重組人溶菌酶不僅具有人溶菌酶的優點, 同時也克服了人溶菌酶活性低、產量低、不便於製備、無法穩定儲存等缺點。 重組人溶菌酶專案工程研究隸屬國家「創新藥物與中藥現代化」重大科技專項 ,屬於國家「863計劃」專案課題。
目前廣 州奇龍生物科技公司有售重組人溶菌酶產品。
重組人溶菌酶為何能殺菌?
4樓:公尺慕
重組人溶菌酶是一種有效的抗菌劑。
它通過其肽鍵上第35位的glu穀氨酸和第52位 的asp天冬氨酸構成的活性部分水解n-乙醯胞壁酸(nam)的1位碳原子和n-乙醯葡萄糖胺穗輪(nag)的4位碳原子間的β-1,4糖苷鍵,破壞肽租爛聚糖支架,在內部滲透壓的作用下引起細菌裂解。
配合使用抗生猜型信素,可加倍放大抗生素滅菌的效果。
重組人溶菌酶殺菌的原理的是什麼?
5樓:陸紅曉
人溶菌酶(human lysozyme)是非特異性免疫因子,是人體產生的肽類抗菌物質
人溶菌酶(human lysozyme)由130個氨基酸組成,分子量為。 人溶 菌酶是由單核-巨噬細胞分泌,在肌體中起非特異性防禦機制,據報道人溶菌酶有抗 感染、抗腫瘤、抗病毒和免疫調節的作用。經過實驗重組人溶菌酶(recombinant
human lysozyme)具有殺菌(包括耐藥菌)、抗炎症、抗病毒( 抗病 毒sars、hiv、hpv、hsv, )和鎮痛作用,沒有過敏反應,無毒***,也不會產生耐藥性,可以長期使用,具有潛在的臨床應用價值。
溶菌酶的製備
6樓:小彬
溶菌酶是採用生物工程技術進行轉殖、提取而製取,它是一種天然酶,安全綠色的新增劑,無抗藥性。
該酶廣泛存在於人體多種組織中,鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中也含此酶,其中以蛋清含量最為豐富。從雞蛋清中提取分離的溶菌酶是由18種129個氨基酸殘基構成的單一肽鏈。它富含鹼性氨基酸,有4對二硫鍵維持酶構型,是一種鹼性蛋白質,其n端為賴氨酸,c端為亮氨酸。
可分解溶壁微並卜球菌、巨大芽孢桿菌、黃色八疊球菌等革蘭陽性菌。
溶菌酶在等電點以下較廣泛的ph值範圍內,分子帶正電荷,可吸附於弱酸性陽離子交換樹脂模漏上,洗脫後鹽析,可得溶菌酶沉澱,再進行精製可得成品。蛋清吸附↓724樹脂洗滌↓緩衝液洗脫↓硫酸銨溶液鹽析透析去鹼性蛋白↓naoh凍幹溶菌酶凍乾粉沉澱乾燥溶菌酶在5~10℃下,將新鮮旦蔽爛蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中,攪拌吸附6h,在0~5℃靜置過夜。傾出上層蛋清,樹脂離心甩幹,用蒸餾水反覆洗去黏附的卵蛋白,然後將樹脂裝入柱內,用0?
15mol/l、ph=6?5磷酸緩衝溶液約150l洗滌樹脂,再用約600l的10%硫酸銨溶液洗脫,收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨,使最終含硫酸銨量為40%,有白色沉澱生成,冷處放置過夜。
虹吸上層清液,沉澱吸濾抽乾,再用1倍蒸餾水溶解沉澱呈稀糊狀,然後裝入透析袋,在約5℃的條件下,對蒸餾水透析24h左右,中間換水2~3次。離心去除沉澱,沉澱再用少量水洗一次,洗液與離心液合併。再往透析清液中慢慢加入1mol/l氫氧化鈉溶液,同時不斷攪拌,使ph值上公升到8?
0~9?0,如有白色沉澱,即離心除去。然後用3mol/l鹽酸調ph=5?
0,冷凍乾燥,即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/l鹽酸調ph=3?5,在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉,在約5℃的溫度下靜置48h,離心,沉澱用0℃丙酮洗滌,乾燥,即得溶菌酶。
重組人溶菌酶有什麼用途?
7樓:匿名使用者
人溶菌酶除可以直接裂解細菌/病菌,還可以作鎮罩悶為免疫調節劑調悶正節中性粒細胞的作用,保護炎症部位的健御彎康組織,在調節炎症反應中起負反饋作用(leo ig,et ;64:222)。
8樓:藥與學
重組人溶菌酶具有多種用途,可以作為抗生素替代品廣泛應用於食品業和畜牧業,還可以應用於醫學方面。
重組人溶菌酶是什麼東西?
9樓:苛苛棟肇糖角局
人溶菌酶是一種有效的抗菌劑,它通過其肽鍵上第35位的glu穀氨酸和第52位 的asp天冬氨酸構成的活性部分水解n-乙醯胞壁酸(nam)的1位碳原子和n-乙醯。
葡萄糖胺(nag)的4位碳原子間的β-1,4糖苷鍵,破壞肽聚糖支架,細菌在內部 滲透壓的作用下引起細菌裂解。
人和動物細胞無細胞壁結構亦無肽聚糖,故人溶菌酶對人體細胞無毒性作用、無耐藥性
10樓:沉崖動畫
溶菌酶具有抗菌、抗病毒和消炎作用,與抗生素複合應用能增強抗生素療效。它還是人體內的非特異性免疫因子,可提高機體的免疫力,並且與其他陽離子抗菌肽類天然防禦因子有很好的協同作用。
11樓:在白鹿島打遊戲的麥兜
重組人溶菌酶是一經生物技術改構後產生的一類對g十和g一菌都有抗菌效應的一類新藥。
12樓:施大爺的朋友
人溶菌酶是一種人體內天然存在的具有抗菌、抗病毒、抗炎、增強免疫力等特性的蛋白質。它直接作用於細菌細胞壁,因此,細菌對其完全不存在耐藥性,也無免疫原性。利用基因工程生產出的重組人溶菌酶不僅具有人溶菌酶的優點,同時也克服了人溶菌酶活性低、產量低、..
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