1樓：匿名使用者
如果樣品足夠多，就多跑幾個同樣的泳道，轉膜後，把膜裁開，封閉，孵育到不同的抗體中。分別可以檢測。
如果要在統一泳道中檢測，就必須要做剝離，否則結果沒法說明了。常用配方如下
stripping solution: 100 mm 2-mercaptoethanol, 2% (w/v) sds, 62.5 mm tris-hcl, ph 6.7
phosphate buffered saline (pbs): 10 mm sodium phosphate, ph 7.2, 0.9% (w/v) nacl
在網上很容易找到相應的資訊，在50-65c孵育一段時間來實現剝脫。不過由於有sds，很可能會造成部分抗原的剝脫。
通常用化學發光的很好剝，用顯色的就比較困難了，螢光的也不太好剝。
如果擔心自己配的不穩定，就去買市售的striping buffer就可以了。
2樓：
只要蛋白未講解，都可以做western blot。
做了目的蛋白後再做beta-actin時，需要洗膜，市面上有專門的膜再生液，你也可以直接用tbst洗滌，適當加大tween20的濃度。
3樓：黑皮地雷
用strip液洗就可以了，洗完之後重新封閉，孵育actin一抗
strip液可以自己配，也可以直接買成品
western blot 的內參不一致，急求助
western blot 內參 actin 是43還是45 kda
western blot為什麼必須要用內參
4樓：匿名使用者
在 western blot 中使用內參其實bai就是在 wb 過程中另du外用內參對應的抗zhi體檢測dao內參，這內樣在檢容測目的產物的同時可以檢測內參的表達，由於內參在各組織和細胞中的表達相對恆定，借助檢測每個樣品內參的量就可以用於校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差，保證實驗結果的準確性。
此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個 western blot 顯色或者發光體系是否正常。
常用的蛋白質內參有 gapdh 和細胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin。 一般要選擇乙個在處理因素作用的條件下蛋白含量不會發生改變的蛋白作內參。——厚百 western blot試劑
以下是常見的內參：
內參名稱 分子量大小 適用範圍
beta-actin 43 kda 胞漿和全細胞gapdh 30-40 kda 胞漿和全細胞tubulin 55 kda 胞漿和全細胞vcda1/porin 31 kda 線粒體coxiv 16 kda 線粒體
lamin b1 66 kda 細胞核tbp 38 kda 細胞核
哪些實驗必須用western blot做
原理與southern或northern雜交方法類似，但western blot採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，探針 是抗體，顯色 用標記的二抗。經過page分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體 例如硝酸纖維素薄膜 上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽型別及其生物學...
western blot的注意事項有哪些
你應該先做一遍 遇到什麼問題了再說 生物實驗都是按照protocol一步步來就行了 沒啥特別需要注意的 wb無非就是膠要配好 電流電壓時間要選好 抗體要好啥的 還是先做著看看吧。westernblot的注意事項有哪些可以詳細點嗎 每個顯影試劑盒都不一樣，建議看說明書。實際情況視螢光強度而定，你看顯出...
western blot顯色方法有哪幾種
有很多種顯示方法，其中hrp 化學發光檢測 ecl supersignal 居多，dab顯色很少見。主要分為兩大類，分別介紹如下 化學發光chemiluminescent 隨著各大廠家努力開發研製靈敏度更高的發光底物，化學發光法的靈敏度已經達到pg級別，甚至還有 femto級別的，靈敏度超過了同位素...