western blot的注意事項有哪些

2023-01-13 19:55:03 字數 3035 閱讀 1771

1樓:網友

你應該先做一遍 遇到什麼問題了再說 生物實驗都是按照protocol一步步來就行了 沒啥特別需要注意的 wb無非就是膠要配好 電流電壓時間要選好 抗體要好啥的 還是先做著看看吧。

westernblot的注意事項有哪些可以詳細點嗎

2樓:世永安

每個顯影試劑盒都不一樣,建議看說明書。

實際情況視螢光強度而定,你看顯出一點兒樣子了,就趕緊撈出來,不然**就太黑……

螢光western blot應注意些什麼

3樓:匿名使用者

抗體濃度應當優化,在幾種不同稀釋度的抗體中孵育膜。選擇訊雜比最高的稀釋度。

從化學發光轉到螢光檢測時,一抗濃度應當增加。

許多封閉液都成功用於螢光檢測。建議使用5% 酪蛋白、最多5%的脫脂奶粉,或最多3% bsa,溶於tbst中。

緩衝液中的顆粒可能停留在膜上,並造成螢光假象。只使用高質量的試劑,並對所有緩衝液過濾滅菌。

使用鈍的鑷子從邊緣操作。避免劃破膜或弄皺,這會在螢光檢測時造成假象。

使用鉛筆來標記膜,因為許多墨水都會發出螢光。

溴酚藍會發出螢光。確保染料與樣品已分開,切掉凝膠上包含染料的部分,或省掉樣品緩衝液中的溴酚藍。

無需在暗處開展免疫檢測;正常的室內燈光不會使螢光標記的抗體發生光漂白。

在處理膜時,使用無粉末的手套,以避免膜上出現假象或指紋。

安全用電的注意事項有哪些?

4樓:張鈺濤

(1) 除持證的電氣專業copy人員外,其餘人一律bai不得隨意亂du動或私自修理部門內zhi

的電氣裝置和dao設施。

(2) 電氣裝置不得帶故障執行;任何電氣裝置在未驗明無電之前 ,一律認為有電,不要盲目接觸。

(3) 電氣裝置必須有保護性接地、接零裝置,並經常進行檢查連線的牢固性。

(4) 需要移動某些非固定安裝的電氣裝置,如照明燈、電焊機等時,必須先切斷電源再移動;移動中,要防止導線被拉斷。

(5) 員工經常接觸和使用的配電箱、配電板、閘刀開關、按鈕開關 、插座以及導線等,必須保持安全完好,不得有破損。

(6)停電後必須切斷電。

5樓:睿爸育兒記

家中用電安全的注意事項有哪些?#星知計畫#

western blot轉膜過程中需要注意些什麼

6樓:回展薄依雲

最重要的就是。

sds-page

膠和膜之間不要有氣泡。。

其次就是轉膜的電壓和時間要和蛋白大小對應上。。。

western blot實驗需要準備什麼試劑和耗材

7樓:匿名使用者

試劑:tris、hcl、nacl、脫脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、顯色劑及sds-page需要的試劑(tris、hcl、temed、sds、過硫酸銨、丙烯醯胺、n,n-甲叉雙丙烯醯胺、甘氨酸、非預染蛋白marker、甲醇、乙酸、考馬斯亮藍r250)、預染蛋白marker

耗材:濾紙、pvdf膜或nc膜、乳膠手套等。

儀器:電泳儀、電轉槽、搖床、製冰機(電轉時需冰浴)等。

8樓:匿名使用者

ripa裂解液、bca蛋白濃度測定試劑盒、ecl發光檢測液、預染蛋白marker、goat anti-rabbit igg(h+l)-hrp、脫脂奶粉、pbs緩衝液、sds上樣緩衝液、電泳緩衝液、轉膜緩衝液、tbst緩衝液、pvdf膜。。。等等太多了。

乙個western blot試劑盒足以了,elabscience wb試劑盒乙個全搞定,你可以了解下。

9樓:西安格物

蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即western blot,簡稱wb。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。

western blot是幹什麼的

10樓:士誠小人也

簡單說,就是檢測蛋白的。

western blot 步驟是什麼?

11樓:小玩子

簡單的說的話,可以大致分為8點:1. 收集蛋白樣品2. 電泳3.轉膜4.封閉5.一抗孵育。

6.二抗孵育7.蛋白檢測8.膜的重複利用,希望可以幫到你哦,你可以到網上找找啊。

western blot的原理、操作及注意事項

12樓:文庫精選

內容來自使用者:xiadi198023

原理:通過電泳區分不同的組分,並轉移至固相支援物,通過特異性試劑(抗體)作為探針,對靶物質進行檢測,蛋白質的western印跡技術結合了凝膠電泳的高解析度和固相免疫測定的特異敏感等多種特點,可檢測到低至1~5ng(最低可到10-100pg)中等大小的靶蛋白。一、抗原的選擇和製備。

a:樣品的製備。

1組織:組織的處理方法:組織洗滌後加入3倍體積預冷的pbs,0℃研磨,加入5×stop buffer,180w,6mins,0℃超聲波破碎,5000rpm,5mins離心,取上清。

加入β-me(加入,溴酚藍(9.

5ml加入煮沸10min,分裝後於-20℃儲存,用時取出,直接溶解上樣。

2細胞:細胞的處理方法:離心收集細胞或者直接往細胞培養瓶內加入5×stop buffer,收集,180w,6mins,0℃超聲波破碎,5000rpm,5mins離心,取上清。加入β-me(9.

5ml加入,溴酚藍(加入0.

5ml)煮沸10min,分裝後於-20℃儲存,用時取出,直接溶解上樣。

3分泌蛋白的提取(特例):

直接收集分泌液,加入β-me、溴酚藍制樣。

b:蛋白的定量方法及影響蛋白定量原因。

1.雙縮脲法:

雙縮脲法是第乙個用比色法測定蛋白質濃度的方法。在需要快速,但不很準確的測定中,常用此法。硫銨不干擾顯色,這對蛋白質提純的早期階段是非常有利的。

雙縮脲法的原理是 1)

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