細胞培養為什麼要先裂解紅細胞？

1樓：nx熙

1. 新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉澱的體積為1ml，則加入3-5ml的紅細胞裂解液。租型前本步驟在室溫或4度操作均可。

3. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4. 如果發現紅細胞裂解不完全，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。

5. 洗滌1-2次：加入適量pbs、hbss、生理鹽水或無血清培養液，重懸沉澱，400-500g離心2-3分鐘，棄上清。

可再重複1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉澱體積的5倍。4℃離心效果更佳。

6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。對於組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟：

1. 新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理，通過適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

2. 對於細胞沉澱加入1ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。

3. 加入15-20ml pbs、hbss、生理鹽水或無血清培養液，混勻。

4. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。租兄。

5. 如果發現紅細胞裂解不完全，可以重複上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。

6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉澱後即可進行計數等後續實驗。弊清。

說明：對於常規步驟，多一步洗滌過程中的離心，但可以節省洗滌液的用量，並且洗滌效果也更好一些，同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

2樓：生熹

血液基因組dna提取前為什麼要先進行紅細胞裂解。

全血基因組dna提取試劑盒作用原理：

全血基因組dna提取試劑盒特異性結合dna的離心吸附柱和獨特的緩衝液系統，提取全血基因組dna。離心吸附柱中採用的矽基質材料為新型材料，能夠高效、專一吸附dna，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。

全血基因組dna提取試劑盒使用說明：

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標籤。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

樣品的處理(本產品適用於處理新鮮的或已經新增抗凝劑的血液樣品)：

a、在血液樣品中加入2-3倍體積的紅細胞裂解液，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min，小心吸去上清，沉澱應為白色或淡紅色，如果裂解不徹底，可重複以上述步驟一次。向沉澱中加200μl溶液ya，振盪至徹底混勻。

b、如果處理的血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低階生物的血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量為5-20μl，不需要再用紅細胞裂解液處理，直接加200μl溶液ya，振盪至徹底混勻。

向懸浮液中加入20μl 的rnase a (10mg/ml)，充分悶沒顛倒混勻，室溫放置10min。

加入20μl的蛋白酶k( 10mg /ml )，充分顛倒混勻，65℃水浴消化30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數次，直至樣品消化完全為止。

加入200μl溶液yb，再加入200μl無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現絮狀沉澱，不影響dna的提取，可將溶液和絮狀沉澱都加入吸附柱中，室溫放置2min。

12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

向吸附柱中加入600μl漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

12000rpm離心2min，將吸附柱祥罩則敞口置於室溫或50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘餘的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響後續的實驗如酶切、pcr等。

將吸附柱放入乙個乾淨的離心管中，向吸附膜**懸空滴加50-200μl經65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。

離心所謹棚得洗脫液可再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質量的基。

3樓：全弘致

細胞培養為什麼要先裂解紅細胞的？那應該就是這樣的東西吧，本來就是這樣的，令人屬於這樣操作。