1樓：匿名使用者
你好，具體的看看這個吧
希望有所幫助
2樓：匿名使用者
現在很多生物公司可以提供載體構建服務的，例如中美泰和生物技術公司
基因表達載體的構建方法是一致的
3樓：為水情狂
基因表達載體的構建 是將目的基因與運載體結合的過程
重組基因表達載體構建途徑有哪些
4樓：匿名使用者
事實上,載體上的各個部件類似工程中的各個功能模組,可以從分子生物學知識中得出.例如,載體需要複製,那必須有複製起點,若是表達載體,還需要有啟動子,終止子,上游調控原件等順式作用元件.此外,載體需要插入外源dna,故需要有多轉殖酶切位點,成功表達載體的宿主需要被選擇出,所以需要有抗抗生素基因等選擇性標記基因.
將目的基因構建在表達載體上的方法有哪些
5樓：匿名使用者
有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切，然後連線到酶切過的表達載體上。第二種是先把pcr產物連到過度載體上，再從過度載體搶切下目的基因，最後再連線到酶切過的表達載體上。
如何構建乙個基因的過表達載體
6樓：風翼殘念
當拿到乙個基因的dn**段後，就需要把它匯入乙個載體，一方面長期儲存。另一方面也需要以載體為媒介將基因匯入受體細胞中。基因表達載體的構建是基因工程的核心。
常用的載體有細菌質粒，噬菌體和動植物病毒。其中質粒載體最常用。所謂載就是乙個很長的環狀dna，攜帶一些基因，可以匯入細菌中自我複製，也可以從細菌中提取出來改造。
現在我們就需要把sun片段連到乙個載體，用vectornti開啟，研究一下用哪個酶處理，這個載體需要用**a1這個酶切開，然後用sun連上，替換切下來的ccdb，這裡要用到兩個酶，乙個**a1限制性內切酶切開，乙個dna連線酶把新片段連上，植物轉基因載體和這些酶都是非常常用的試劑。
載體構建好之後需要把它們匯入大腸桿菌中複製，這裡就要用到大腸桿菌的感受態了，十把構建好的載體和感受態混合，然後放到42度熱水處理個1分鐘，再冰上放個3分鐘。
這時需要一些培養細菌的培養基來培養菌們，大腸桿菌這種菌很好養活，唯一需要注意的是，滅菌過後的培養基要小心儲存。把在冰上處理過的大腸桿菌放到培養基中培養一天，為了防止沒有轉入載體的菌也混進來，我們在載體上加入了乙個抵抗抗生素的基因。
這樣我們在培養基中加入這種抗生素，在裡面就只有需要的大腸桿菌能生長了。最後得到了上億個攜帶著含有我們的sun基因的載體的大腸桿菌，這時就需要把質粒再提出來。
實驗室裡提質粒需要用專門的試劑盒，也可以簡化一下，先把菌液離心讓菌沉澱，然後再用水把菌打散，然後煮沸1分鐘再離心，取上清，上清中加乙醇讓dna析出，再離心讓dna沉澱，最後用水把dna溶解。這樣提出來的dna會有很多雜質以及細菌的基因組dna。
7樓：匿名使用者
用限制酶分別切割目的基因兩側及運載體，然後在dna連線酶的作用下就形成了基因表達載體。
8樓：紫耀星之軌跡
首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現乙個缺口，露出黏性末端。然後用同
一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成乙個重組dna分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒dna分子結合，形成重組dna分子（也叫重組質粒）的。
完整的基因表達載體包括哪些
9樓：匿名使用者
基因表達載體的構建是基因工程的核心步驟，而基因表達載體的本質是dna，組成元素有碳氫氧氮磷，其中氮在含氮鹼基中，磷在磷酸基團中
完整的表達載體必須包括：
1、複製子,在細菌中擴增時所必須.
2、啟動子,目的基因在細菌或細胞中轉錄所必須,轉錄了才能翻譯,是謂「表達」.
3、原核篩選標記,細菌增菌所必須.
4、真核篩選標記,如果是真核表達,就是必須的.
5、多轉殖位點,即酶切位點,插入目的片段的區域.
6、其他所需構件,可視實驗設計情況而選用現成載體或在載體上自行新增.
另：表達的起始和終止,在目的基因上附帶起始密碼子和終止密碼子.
10樓：千耀化秋柔
啟動子：rna酶的結合部位
終止子：一段有特殊結構的dna短片段，轉錄結束的標誌目的基因：這個一定得有，不解釋
標記基因：共重組dna的鑑定和選擇
複製原點：dna複製起點，即dna聚合酶結合位點
關於基因表達載體的構建
11樓：我就是n動人
說說它們的作用吧
目的基因就是能夠產生
所需蛋白質的dn**段，比如抗蟲棉就是植入能產生抗蟲蛋白的目的基因。
啟動子、終止子：啟動子、終止子是目的基因dna上特殊排序的鹼基。rna從啟動子開始轉錄、翻譯，到終止子結束。
整個過程完成後便產生所需蛋白質。如果不清楚rna的轉錄翻譯過程，可以再細說。
標記基因：用於檢測是否已經植入目的基因。植入的成功率其實很低，所以有必要選出已經植入的個體。
比如抗蟲棉，判斷是否植入，用種植後讓蟲子吃的方法判斷週期太長。所以在目的基因前或後植入比如抗四環素基因（如果目的基因成功植入，抗四環素基因也一起植入），然後用四環素來淘汰植入失敗的個體，剩下的都是還有目的基因的個體。除了抗四環素基因，還有螢光基因等，總之就是方便檢測。
應該很詳細了吧。。。
12樓：裝子
北京鼎國生物提供載體構建實驗室課題服務，包括其它實驗室等課題服務，您可以諮詢下
構建基因表達載體需要哪些工具
13樓：匿名使用者
大致需要以下幾種東西：（1）原始表達載體，用以把目的基因連上去；（2）擴增目的基因的模板；（3）核酸內切酶，用於切割載體和目的基因；（4）連線酶，用於連線目的基因和載體；（5）大腸桿菌感受態，用於轉化篩選陽性轉殖。
14樓：佛樹花江燕
在構建基因表達載體時要用到的工具酶有限制酶和dna連線酶。
基因表達載體的構建（即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。
過程：首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現乙個缺口，露出黏性末端。然後用同
一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成乙個重組dna分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒dna分子結合，形成重組dna分子（也叫重組質粒）的。
為什麼基因表達載體的構建是基因工程的核心
因為目的基因要靠運載體進入受體細胞，然後目的基因才能在受體細胞中表達。所以基因表達載體的構建是基因工程的核心 下列關於基因表達載體的構建描述錯誤的是 a 基因表達載體的構建是基因工程的核心b 基因表達載體 a 基因表達載體使目的基因在受體細胞中穩定存在並且可以遺傳給下一代並表達和發揮作用，是基因工程...
我構建了基因的真核表達載體，轉染293T細胞後以空質粒PCDNA3 1及未轉染質粒的孔為對照，還有以PBS
如果293t本身不表達這個蛋白的話，最大的可能是一抗質量不過關 你可以做一下免疫印跡看看。免疫組化假陽性多正常 非特異性吸附 免疫印跡western blotting用分子量大小來判斷，很難出假的。是目的基因的抗體做的麼？是不是293t本身表達這個蛋白？贏潤生物技術支援 孫永林 加qq1269592...
如何將兩個基因構建到同載體上,如何將兩個基因構建到同乙個載體上
利用同一限制性內切酶種切取同一種粘性末端然後再用同一種連線酶講他們聯絡起來，再用質粒將其匯入受體菌的染色體中，還可以用soe pcr法將兩基因連到一起，但你要考慮載體啟動子的問題，可能由於融合基因構象或啟動子能力的問題無法正確表達。你可以設計雙啟動子。就是dna酶切和連線實驗，具體什麼基因什麼內切酶...