1樓:秒懂百科精選
dna測序的方法簡介
2樓:匿名使用者
目前用的比較多的是離心法和磁珠法,我們實驗室用biodai離心法提取目標jdna,能處理的1.0ml的樣本,且樣品處理成本比磁珠法低
獲取目的基因的方法有哪些(詳細)
3樓:奔三不再二
獲取目的基因的方法主要有兩種:
一是從供體細胞的dna中直接分離基因,最常用的方法是「鳥槍法」又叫「散彈射擊法",另一種是人工合成基因,這種方法有兩條途徑,
二是以目的基因轉錄的信使rna為模板,反轉錄成互補的單鏈dna,再在酶的作用下合成雙鏈dna,即目的基因,另一條途徑是蛋白質的氨基酸序列,推測出信使rna序列,再推測出結構基因的核苷酸序列,然後用化學的方法以單核苷酸為原料合成.
4樓:匿名使用者
..剛好學到
基因工程流程的第一步就是獲得目的dn**段,如何獲得目的dn**段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的**,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了(基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程式如下:
① 選用特定限制性內切酶, dna進行部分酶解,得到dna限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體dna。③ 經適當處理,將基因組dna限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。
⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌,形成大量噬菌斑,從而形成含有整個dna的重組dna群體,即文庫。)經典解釋
2.cdna文庫法(即原教材中提到的逆轉錄法)。cdna文庫,是指匯集以某生物成熟mrna為模板逆轉錄而成的cdna序列的重組dna群體。
雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因,但是由於高等真核生物基因組dna文庫比其cdna文庫大得多,相關工作量同樣大得多。更為重要的是,在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子,但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在,所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列,即不能表達真核生物dna。而在真核生物成熟mrna中已不存在間隔序列(已在拼接過程中被去除),所以可以以真核生物成熟mrna為模板,逆轉錄而成的cdna可被大腸桿菌表達。
因此,在基因工程中,cdna文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥,無論哪一顆彈粒擊中目標,都能把鳥打下來。
鳥槍法的具體做法是:用限制酶(即限制性內切酶)將供體細胞中的dna切成許多片段,將這些片段分別加載運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分別在受體細胞中大量複製(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法吧帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲,抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便,缺點是工作量大,具有一定的盲目性。
人工合成
1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過dna自動合成儀,通過固相亞磷酸醯胺法合成,具體過程可以網上查詢,反正是可以按照已知序列將核苷酸乙個乙個連線上去成為核苷酸序列,一般適於分子較小而不易獲得的基因。
對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物,再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重複性好、易自動化等突出優點;能在乙個試管內將所要研究 的目的基因或某一dn**段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷;可從一根毛髮、一滴血、甚至乙個細胞中擴增出足量的dna供分析研 究和檢測鑑定。
過去幾天幾星期才能做到的事情,用pcr幾小時便可完成。pcr技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑
他只是給目的基因的擴增
好累~....
5樓:abc高分高能
如何從基因文庫中獲取目的基因
6樓:糟油酒丸
請看擺渡百科「人工合成基因」條目。
直接獲取的。。。用引物pcr出來--請看擺渡百科「分子轉殖」條目。
dna的提取方法有多少種
7樓:禿頭美少女
dna的提取方法有7種:酚抽提法、甲醯胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇沉澱法、表面活性劑快速製備法、加熱法快速製備、鹼變性快速製備。
dna的提取原則
1、保證核酸一級結構的完整性;
2、核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;
3、其他生物大分子如蛋白質、多醣和脂類分子的汙染應降低到最低程度;
4、其他核酸分子,如rna,也應盡量去除。
提取dna的注意事項
1、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。
3、 要減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱。
4、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理。
5、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製。
8樓:匿名使用者
現在最省時省力的是用全自動核酸提取儀,應該每個實驗室都配備了吧,可以節省不少時間用來做其他事情,用過biog的感覺很舒服,看著也不呆板。
9樓:小乖乖小鬧鬧
(1).濃鹽法 (2).陰離子去汙劑法:(3).苯酚抽提法 也可以試著用biog提取
dna提取的方法有幾種分別是什麼,哪種是現在最常用的?
10樓:文建設連午
關於dna的提取方法在《分子轉殖》一書中有詳細介紹,其中最常用的質粒提取方法包括:
這其中sds鹼裂解法又是最常使用的提取方法。
當然針對不同組織樣品dna的提取方法是不同的,具體還是要參考《分子轉殖》等工具書。
另外,針對不同組織的dna樣品,就是都有很多成熟的試劑盒可以使用。如果不是大批量使用或者經費充足的話,可以考慮購買試劑盒,一般可以提取到更高質量的dna,並且也可以節約不少自己摸索的時間。
質粒dna的提取方法
不知道樓主你說的對照 組,做的是陽性對照,還是陰性對照呢?如果這個不說清楚,是沒法回答你的問題。假設,你說的對照是陰性對照的話,首先第乙個,1,這個結果就是不對的,對照組出現菌落,說明你的抗生素失效了,實驗無效。2.的話說明你的轉化沒有成功,實驗操作跟試劑沒問題3.實驗成功,可以挑取單轉殖搖菌 假設...
在基因工程中,獲取目的基因的方法有哪些
一般常用的是cdna法及建立基因文庫的方法篩選法,還有就是rt pcr和電子轉殖 獲取目的基因的方法有哪些 詳細 獲取目的基因的方法主要有兩種 一是從供體細胞的dna中直接分離基因,最常用的方法是 鳥槍法 又叫 散彈射擊法 另一種是人工合成基因,這種方法有兩條途徑,二是以目的基因轉錄的信使rna為模...
植物細胞中的胞內酶提取有哪些方法
給你兩點提示l.酶的實質就是蛋白質或rna,所以聯絡課本,看一看哪些實驗涉及這些知識。2.據我所知,人教版好像沒有關於這方面知識。天然植物提取酶有哪些方法 首先,破碎植物細胞。然後,根據所需要的酶的結構和溶解性質,選擇適當的溶劑提取。為了提高提取率,防止酶變性失 活,在提取過程中要注意控制好溫度,p...