1樓：乙隻筆
不合宜人群：無特殊要求。 檢查時的禁忌：
禁忌暴飲暴食，和劇烈運動，適宜在早晨空腹檢測。 檢查時要求：試驗前應做預試驗，確定抗體的稀釋度。
加樣時不要將瓊脂劃破，以免影響沉澱線的形成。加樣時不同濃度抗體和抗原不要混淆，影響試驗結果。
請教做瓊脂擴散實驗的方法
2樓：匿名使用者
瓊脂擴散試驗（gel diffusion test） 可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本型別有單向擴散和雙向擴散兩種。 （一）雙向瓊脂擴散試驗（double immunodiffusion test） 抗原和抗體加到瓊脂板上
瓊脂擴散試驗的檢查過程
3樓：砿鄿
雙向瓊脂擴散試驗是在含有電解質的半固體瓊脂板上，將可溶性抗原和抗體分別加入具有一定距離和孔徑的小孔內，使其在一定條件下相互擴散，兩者在比例合適處相遇，形成白色沉澱線(帶)。當存在多種抗原抗體系統時可出現多條沉澱線，然後可根據沉澱線的數目、位置、形狀對抗原抗體系統進行分析。單向瓊脂擴散又稱單向環狀免疫擴散，是一種定量測定抗原的方法。
常用來檢測標本中各種免疫球蛋白及血清中各種補體成分的含量。靈敏度高，可對免疫性疾病作輔助診斷。
請教做瓊脂擴散實驗的方法？
4樓：匿名使用者
瓊脂擴散試驗（gel diffusion test）
可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉澱。基本型別有單向擴散和雙向擴散兩種。
（一）雙向瓊脂擴散試驗（double immunodiffusion test）
抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間後，在抗原、抗體孔之間出現清晰緻密的白色沉澱線。每一抗原與其相對應抗體只能形成一條沉澱線，若同時含有若干對抗原抗體系統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉澱線。且根據沉澱線融合情況，還可鑑定兩種抗原是完全相同還是部分相同。
所以，可用此法來分析和鑑定標本中多種抗原或抗體成份，並用以測定抗原或抗體的效價。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精製瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器（直徑3mm）、溼盒、吸管等。
【方法】
1、用生理鹽水配製1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁熱澆於載玻片上，製成瓊脂板。
2、待瓊脂凝固後，按右圖用打 孔器打孔，並用針頭挑去孔中瓊脂 （孔距為5mm）。
3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢位。
4、將加好樣品的瓊脂板置於溼盒內，於37℃溫箱內放置24小時後觀察結果。
【結果】
觀察孔間沉澱線的數目與特徵，一般可注意到以下幾種現象：
1、抗原與抗體孔間形成一條沉澱線，說明只有一種抗原與相對應的抗體特異性結合，如出現數條沉澱線，說明有幾組不同的抗原和相對應抗體相結合。
2、根據抗原的成份可有以下三種現象：（1）若二孔中的抗原相同，與相應抗體形成的沉澱線融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，當抗血清中分別含有與抗原相應的抗體時，則形成的沉澱線相交叉；（3）若兩孔中抗原部分相同，抗血清中有各相應的抗體，形成的沉澱線相切。
3、相應抗原抗體所形成的沉澱線，如二者濃度相當，沉澱線在孔**，二者濃度不當時，則沉澱線偏向濃度低的一側
（二）單向瓊脂擴散試驗（single immunodiffusion test）—人血清中igg、iga、igm的測定。
單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗，將抗體混合於瓊脂內，傾注於玻片或平皿上，凝固後在瓊脂上打孔，再將抗原標本加入孔內，經過一定的時間，在孔的周圍出現抗原抗體複合物形成的沉澱環，環的大小與抗原含量和擴散時間相關。用不同濃度的抗原製成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從準標曲線中求出。本試驗主要用於檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量。
材料】igg、iga、igm免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器（10微公升）、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。
【方法】
1、免疫瓊脂板製備：將1.5%瓊脂（用ph8.
2、0.05m的巴比妥緩衝液配成），加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清（抗血清最終稀釋度取決於抗血清所標化的稀釋度），混勻，製成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固後打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.
2cm。
2、稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解後使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。
3、加樣：將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內，其餘孔滴加待檢的稀釋血清，每個檢樣加兩個孔，每孔滴加10微公升。
4、擴散：將免疫板置水平溼盤內，放進37℃溫箱，igg免疫板擴散24小時，iga、igm板48小時後取出置黑色背景前觀察結果，（如果沉澱環不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小時後觀察），必要時可以染色後觀察。
5、繪製標準曲線及血清標本中igg、iga、igm定量測定：測量沉澱環直徑。沉澱環直徑的大小除與抗原量相關，還與分子量和擴散時間有關。
這種沉澱環直徑與抗原含量的關係不是直線相關，而是對數關係，這種關係有兩種計算方法：
（1）mancini曲線－適用於大分子抗原和長時間擴散（＞48小時）的結果處理。使用方格計算紙劃線，沉澱環直徑的平方與抗原濃度呈線性關係。公式表示：
c／d2 ＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
（2）fehey曲線－適用於小分子抗原和較短時間（24小時）擴散的結果處理。使用半對數紙劃線，濃度的對數與沉澱環之間呈線性關係。公式表示：
logc／d＝k（c＝抗原濃度，d＝沉澱環直徑，k＝常數）。
【結果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。
瓊脂擴散試驗的介紹
5樓：奔放神
瓊脂擴散試驗為可溶性抗原與相應抗體在含有電解質的半固體凝膠(瓊脂或瓊脂糖)中進行的一種沉澱試驗。瓊脂在實驗中只起網架作用，含水量為99%，可溶性抗原與抗體在其間可以自由擴散，若抗原與抗體相對應，比例合適，在相遇處可形成白色沉澱線，是為陽性反應。沉澱線在凝膠中可長時間保持固定位置並可經染色後乾燥儲存。
沉澱線(帶)對抗原與抗體具有特異的不可透性，而非特異者則否。所以乙個沉澱線(帶)即代表一種抗原與抗體的沉澱物，因而本試驗可對溶液中不同抗原抗體系統進行分析研究。
影響瓊脂擴散試驗結果的因素有哪些
6樓：匿名使用者
⑴配抗菌藥物
原液前要清楚抗菌藥物原粉的百分含量、批號和生產廠家。 ⑵配製抗菌藥物原液時，可能會遇到抗菌藥物難溶的現象，這就要求用相應的助溶劑溶解。 ⑶抗菌藥物原液的終體積要用容量瓶定容。
⑷單位的換算（如 強力黴素，含量887iu/mg，計算配製1280mg/ml 的強力黴素50毫公升，需要多少克強力黴素原粉？） 抗生素的效價通常以重量或國際單位（iu)來表示。 青黴鈉1mg=1667 iu或1 iu＝0.
6 mg 青黴素鉀1mg=1559 iu或1 iu＝0.625 mg 制黴菌素1mg=3700 iu 其他抗生素多以重量為單位或1mg=1000 iu ⑸抗菌藥物原液的終濃度可增大到5120mg/ml，這可縮減加入紙片中的抗菌藥物原液的體積。 ⑹根據標準，有時要求紙片的抗菌藥物含量較低，加入的抗菌藥物原液的量過少，不足以將50片紙片全部潤濕時，應將抗菌藥物原液用相應的滅菌pbs稀釋到0.
5ml，混勻後再加入西林瓶內。 ⑺製作紙片時，要多做幾份進行高壓，以備試驗失敗重做時，節約時間。 ⑻藥敏紙片在37℃烘乾，可能需要一到兩天的時間，切勿將紙片放入高溫中烘乾，以防藥物失效。
⑼密封紙片後，可放入4冰箱儲存或置陰暗乾燥處儲存，切勿受潮。
7樓：王拔沃爾雲
單相瓊脂擴散試驗原理，
一種定量試驗，將一定量的抗體混合於瓊脂內，傾注於玻片上，凝固後，在瓊脂層上打孔，再將抗原加入孔中，使其向四周擴散。抗原抗體複合物形成的沉澱環直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原製成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從標準曲線中求出。
本試驗主要用於檢查標本中各種免疫球蛋白和血清igg含量。
生物幫有這方面的知識
常用瓊脂擴散試驗的瓊脂濃度為多少？
8樓：廖佳一
1．材料和試劑
（1）ph8.6，0.1m巴比妥——巴比妥鈉緩衝液
巴比妥鈉 10.3 g
巴比妥 1.84 g
硫柳汞 100 mg（防腐劑）
蒸餾水加熱溶解並定容至500ml
（2）1%預復瓊脂（或瓊脂糖）
1g瓊脂（或瓊脂糖）加蒸餾水100ml溶化即可。
（3）1%瓊脂糖凝膠
1g瓊脂糖加50ml蒸餾水置水溶中煮沸溶解或用與波爐加熱溶解（注意不要溢位且注意加入蒸發的水），然後再加入50ml上述巴比妥緩衝液混勻，置4℃儲存備用。
（4）抗原及相應免疫血清。
單向瓊脂擴散試驗 是一種常用的定量檢測抗原的方法。將適量稀釋後的抗體與等量瓊脂混勻，澆注成板，凝固後，在板上打孔，孔徑3mm，孔間距10mm，孔中加入抗原，每孔10μl，放置溼盒中，37℃溫箱，抗原就會向孔的四周擴散，邊擴散邊與瓊脂中的抗體結合。24h－48h後觀察結果，在兩者比例適當處形成白色沉澱環。
沉澱環的直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標準抗原製成標準曲線，則從曲線中可求出標本中抗原的含量。本試驗主要用於檢測標本中各種免疫球蛋白和血清中各種補體成分的含量，敏感性很高。
雙向瓊脂擴散試驗 測定時將加熱溶化的瓊脂或瓊脂糖澆至玻片上，等瓊脂凝固後，打多個小孔，將抗原和抗體分別加入小孔內，使抗原和抗體在瓊脂板上相互擴散。當二個擴散圈相遇，如抗原和抗體呈特異性的結合且比例適當時，將會形成抗原抗體複合物的沉澱，該沉澱可在瓊脂中呈現一條不透明的白色沉澱線。如果抗原與抗體無關，就不會出現沉澱線，因此可以通過該試驗，用特異性抗體鑑定抗原，或反之用已知抗原鑑定抗體。
另外沉澱線的特徵與位置不僅取決於抗原，抗體的特異性和濃度，而且與其分子的大小及擴散速度有關，當抗原體存在多種成分時，將呈現多條沉澱線以至交叉反應線，因此可用來檢查抗原和免疫血清的特異性、純度或濃度比較抗原之間的異同點，因而應用範圍較廣。
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