1樓：網友
鹼裂解法從大腸桿菌製備質粒，是從事分子生物學研究的實驗室每天都要用的常規技術。可是我收研究生十幾年了，幾乎毫無例外的是我那些給人感覺什麼都知道的優秀學生卻對鹼法質粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因為《分子轉殖》裡面只講實驗操作步驟，而沒有對原理進行詳細的論述。
這是導致我的學生誤入歧途的主要原因。後來我發現其實是整個中國的相關領域的研究生水納李平都差不多，甚至有很多「老師」也是這個狀態。這就不得不讓人感到悲哀了。
我想這恐怕和我們的文化有點關洞明遲系。中國人崇尚讀書，「學而優則仕」的觀念深入人心。經常聽到的是父母對他們的獨苗說，你只要專心讀好書就可以了。
所以這讀書的定義就是將教課書上的東西記住，考試的時候能拿高分……這就是槐歲現代科學沒有在中國萌發的根本原因。如果中國文化在這一點上不發生變化，那麼科學是不能在中國真正紮根的，它只能蛻化成新的「八股學」。 生命科學是實驗科學，它講究動手。
如果實驗科學只要看看書就可以了，那我想問有那位神仙看看書就會騎自行車了？或者聽聽體育老師的講解就會滑冰了？可是光動手不思考，不就成了乙個工匠？
乙個合格的生命科學研究者，需要在這兩方面完善自己。乙個傑出的科學工作者，是乙個熟知科學原理並善於應用的「藝術家」。 每個曾經用鹼法抽提過質粒的同學，希望你看本文後能有所思考，讓中國的未來有希望。
大提質粒原理
2樓：無雅詩
大提質粒提取主要有鹼裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。
鹼裂解法原理：根據共價閉合環狀dna與線性dna的拓撲學結構差異來分離的。在強鹼環境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，基因組dna和質粒dna被釋放出來，線性dna雙螺旋結構被破壞而發生變性。
雖然在強鹼的條件下共價閉合環狀質粒dna也會發生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，並緊密的結合在一起。當加入的乙醋酸鉀高鹽緩衝液使ph恢復中性時，共價閉合環狀質粒dna復性快，而線性的染色體dna復性緩慢，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體dna會相互纏繞成大型複合物，後者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用鉀離子取代鈉離子時，複合物會從溶液中有效地沉澱下來，離心除去變性劑後，就可以從上清中**復性的質粒dna。
煮沸法裂解：將細菌懸浮於含triton x-100和能消化細胞壁的溶菌酶緩衝液中，然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了破壞細胞壁外，還有助於解開dna鏈的鹼基配對，並使蛋白質和染色體dna變性。
但是，閉環質粒dna彼此不會分離，這是因為他們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構，當溫度下降後，閉環dna的鹼基又各自就位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體核蛋白質，就可從上清中**質粒dna。煮沸裂解法對於小於15kb的小質粒很有效，可用於提取步至lml（小量製備），多至250ml（大量製備）菌液的質粒，並且對大多數的大腸桿菌菌株都適用。
小量一步提取法：由於細菌染色體dna比質粒大得多，受機械力後細菌染色體dna會被震斷成不同大小的線性片段而纏繞附著在細胞碎片上，併發生變性。同樣受機械力質粒dna會變性，機械力消失後復性。
但質粒dna的復性快，仍溶於溶液而細菌染色體dna復性較慢，會形成不溶的網狀結構，通過高速離心可以分離得到質粒dna 。
質粒提取原理
3樓：品博
質粒是細胞內的一種環狀的小分子dna 是進行dna重組的常用載體 作為乙個具有自身複製起點的複製單位獨立於 細胞的主染色體之外 質粒dna上攜帶了部分的基因資訊 經過基因表達後使其宿主細胞表現相應的性狀 在dna重組中 質粒或經過改造後的質粒載體可通過連線外源基因構成重組體。
從宿主細胞中提取質粒dna 是dna重組技術中最基礎的實驗技能 分離質粒dna有三個步驟。
培養細菌使質粒擴增 收集和裂解細菌 分離和純化質粒dna
在質粒提取過程中 由於機械力 酸鹼度 試劑等的原因 可能使質粒dna鏈發生斷裂 所以 多數質粒粗提取物中含有三種構型的質粒 共價閉合環狀dna（cccdna）質粒的兩條鏈沒有斷裂 超螺旋開環dna（ocdna）質粒的一條鏈斷裂 鬆弛的環狀分子線形dna（ldna） 質粒的兩條鏈均斷裂 線性分子質粒dna的分子構型。
質粒dna瓊脂塘凝膠電泳模式圖可分為 鬆弛線性的dna 松馳開環的oc構型超螺旋的sc構型 由於瓊脂糖中加有嵌入型染料溴化乙錠 因此 在紫外線照射下dna電泳帶成橘黃色 道中的sc dna走在最前沿 oc dna則位於凝膠的最後邊 道中的l dna是經核酸內切限制酶切割質粒之後產生的 它在凝膠中的位置介於oc dna和sc dna之間。
便宜煙和貴菸哪種對身體危害大，抽貴菸與抽便宜煙對於人體的危害哪個大啊
這樣下去肯定不行的，抽菸又喝酒危害最大，兩者會發生作用，有害物質會有更多殘留。毒素是慢慢累積的，往往到發現的時候就晚了，建議定期去醫院做做檢查。至於戒掉嘛，慢慢減吧，每天控制一點，每天減少一點攝入量，不是馬上一點不抽不喝就可以解決的。這樣的話也不會有那麼多的 那個那個 了，這樣堅持一些時候，可以控制...
LOL提姆符文天賦和出裝求解常用提姆的大神來不要粘粘
我用提莫最近玩了30多把，只輸過兩把。符文標準ad符文，如果走下路，一級e，二級q，接著主e副q。提莫前期沒有ap 打野來gank，最好還是猥瑣些，老實補兵，不要想著殺人。有機會再說。6級下路兩草叢多放。還有河道上靠岸的草叢裡放倆，不要橫著放，豎著放。保證有人能踩到。然後在小龍和藍boff過道上放乙...
菸癮大的人一天抽多少煙，我一天抽一包算多嗎，怎麼才能戒菸，有什麼好的注意嗎
哥們 我是資深菸民，現在我成功戒菸 半年了，雖然看到別人抽菸 自己心裡癢癢 但是只要有乙個信念 一定會成功，打比方說 你老婆不讓你抽菸，你偏要抽 你想想為了抽菸 和老婆吵架 幹嘛？划算不，自己心裡應該多想想 抽菸沒什麼的，是男人 忍忍就過去了，沒什麼的，戒菸 不是強制性的，只要心裡有個信念 一定會戒...