1樓:浦恐
pcr體系就是指一定比例的pcr要素(水、引物、酶、鎂、dntp、模板)的混合物。常用的體系有10微公升、20微公升、25微公升、50微公升等。通常小體系用於檢測、分析,而大體系用於**pcr產物。
但是要注意,一種體積的體系,內部pcr各要素的比例可能是多樣的,這需要自己進行調整,以獲得最好的擴增效果。
2樓:匿名使用者
pcr的反應體系可以配成25ul,50ul,100ul不等,小體系用於檢測,大體系用於**,你要是配成25的體系,可以上下游引物各1ul,tag酶0.5ul,dna模板1ul,dntp2ul,其餘用水補足。
3樓:海藍色的瓶子
pcr體系一般有無菌水、氯化鎂、dntps、上下游引物、taq酶和dna模板組成
你說的25微公升是混合液的總體積,還有用50微公升的,根據需要而定。
4樓:休佑平緒茶
就是你的buffer、引物、探針、dntps、酶、擴增模版(純化的樣本)、水全加起來的體積為25μl。
用於臨床的pcr常用的體系有20、25、50、100,其中50、100最常見
用於科研的pcr常用的體系有10、20、25,其中20、25最常見
什麼是25微公升pcr反應體系
5樓:北京索萊寶科技****
就是你的buffer、引物、探針、dntps、酶、擴增模版(純化的樣本)、水全加起來的體積為25μl。
用於臨床的pcr常用的體系有20、25、50、100,其中50、100最常見
用於科研的pcr常用的體系有10、20、25,其中20、25最常見
pcr反應體系50ul改25ul
6樓:匿名使用者
不會。進行pcr反應試驗的時候,其各種物質的含量是以終濃度來表示,即你所加入物質的量除以整個反應物總體積,只要終濃度不變,試驗結果是不會變的,也就是你產物的濃度時不會變的。只不過是你的pcr產物量減半了,如果你用來進行轉殖的話就要注意夠不夠。
還有,你說的迴圈數,迴圈數沒有乙個固定的標準,是根據你的試驗要定。一般32—37個迴圈足夠,因為在pcr後期迴圈中,隨著taq酶以及各種離子的減少,不足以提供pcr的量,從而影響反應。建議你在做你這個試驗的時候,可以看看文獻,看看別人所用的試驗體系。
從而確定你的pcr反應程式。
7樓:浦恐
機器程式不用改,你的40個迴圈已經夠多了,再加多迴圈擴增效率也不高。產物濃度基本不會變,但產物總量會少。
8樓:
1,視pcr儀而定,老式的不用改程式,某些新pcr儀會根據體系調溫度,這種情況下要在機器上改一下;
2,迴圈數不用改變;
3,產物濃度理論上不變;
9樓:匿名使用者
pcr儀程式體系設定那裡要改成25微公升體系,迴圈數不變,最後得到的產物濃度原則上沒有改變
pcr反應體系中引物濃度20um指的是什麼,還有20微公升體系怎麼換算成50微公升體系呢,還望高手指點啊
10樓:糟油酒丸
20um引物濃度指得是引物working solution的濃度。也就是說,當你從裝有引物的管內,吸取一定量,加入到pcr master mix配成反應混合液的時候,這個引物管內的濃度是20um。如果1ul的這個濃度引物加入到50ul反應中,引物終濃度將是0.
4um。
實際反應體系中的引物最終濃度最常見是0.5um,也可在0.1-0.5um之間選取。
20ul體系換算成50ul體系,最簡單就是每種要加的試劑或水體積分別乘2.5, 濃度不變即可。
11樓:
m就是mol/l 其實一般20和50ul體系的區別只是mix和水的量不同 引物和模板加入量一樣都可以
12樓:匿名使用者
20um指的的引物的摩爾濃度!一般情況下我們實驗室50微公升的體系加水42,dntp1微公升,buffer10微公升(10*),上游fp1微公升,下游1微公升,酶1微公升。效果不錯
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