1樓：老藝術家
革蘭氏染色需要注意哪些問題：1.選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。
2.塗片
不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。
3.脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。
原理：
通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙。
因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
2樓：小王閒談娛樂
選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。塗片不宜太過厚，以免脫色不完全造成假陽性。脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。
通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙。
革蘭氏染色注意事項
在整個革蘭氏染色過程中，在保證試劑有效的前提下，需要嚴格控制的幾個方面：染色菌必須是在其活躍期內，塗佈狀態不可太厚，媒染時間嚴格控制在50s-60s之間，脫色時間嚴格控制在20s-30s。
以典型的革蘭氏陰性菌大腸埃希氏菌為例，有人做過統計，媒染時間嚴格控制在40s-60s之內，染色結果準確率基本可達到100%，而超過60s準確率會有一定的降低，若媒染超過100s，準確率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染過程中一定要注意媒染時間，控制在50-60s為宜。
3樓：景田不是百歲山
1、革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受塗片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規定。
2、染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。
3、選用幼齡的細菌。g+菌培養12h-16h，e.coli培養24h。若菌齡太老，由於菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。
4樓：小仙鸛七号
注意安排g+ g- 對照 過火時候不要太久 孔雀綠不要烤糊了
5樓：匿名使用者
在實驗中需要注意，經常會出現假陽性和假陰性的結果，假陽性主要是由於脫色不完全，可能是由於塗片過厚，或者是結晶紫染色過度，導致脫色不完全。假陰性可能是因為細胞固定過度，造成細胞壁通透性的改變，而出現假陰性結果；另外，細胞培養時間太長，可能已經有部分細胞發生死亡或者自溶，也導致細胞壁通透性的改變而出現假陰性結果。
6樓：卓美落飛
需要注意顏色和脫色時間
7樓：匿名使用者
需注意操作前選用活躍生長期（18-24h的菌落）菌種染色，培養時間過久的的陽性菌，可能會因為細胞死亡或自溶導致細胞壁通透性改變而被染成紅色造成假陰性。
①塗菌前將塗菌部位在火焰上烤一下用於除去油脂，再挑取適量的菌，不宜過多，均勻塗開不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。
②固定時玻片過火時間不能太久，來回2-3次③染色過程中勿使染色液乾涸。
④脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，20-30s為宜，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。
⑤用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。
革蘭氏染色： 2.塗片後為何要固定，固定要注意\什麼 3.說明是革蘭氏染色。染色過程要注意什麼。 4.用油鏡
8樓：
防止沖洗掉。手持玻片一端，使塗面朝上，通過微火2—3次。在火上固定時，用手觸控塗片反面，以不燙為宜，不可使載片在火上烤，以免細菌形態被毀壞。
時間的掌控，塗片的均勻，沖洗是防止汙染，傾斜沖洗
先低倍鏡，高倍鏡，在油鏡，塗油少量，二甲苯清洗玻片，油鏡
要得到正確的革蘭氏染色結果必須注意那些操作?關鍵在那幾步?為什麼?
9樓：姓媛子車蓮
脫色肯定最重要。
其實塗片的時候也要注意塗均勻，並且兩個菌的量也要差不多，否則太厚的地方脫色就不均勻了。還有固定時不要燒過頭，以免菌體萎縮變形。
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