1樓:匿名使用者
有些原核生物擁有獨立於核dna的質粒dna,但不是所有的質粒dna都可以表達,原核共表達質粒就是指那些可以同核dna一起表達的質粒dna。
2樓:匿名使用者
能夠在原核中表達目的基因的質粒
3樓:匿名使用者
就是同時表達兩個蛋白
真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別~急求~~
4樓:學雅思
一、指代不同
1、真核過表達質粒:真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
2、原核過表達質粒:能攜帶插入的外源核酸序列進入原核細胞中進行表達的載體。
二、特性不同
1、真核過表達質粒:該質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
2、原核過表達質粒:啟動子是dna鏈上一段能與rna聚合酶結合並起始rna合成的序列,它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子,基因就不能轉錄。
由於細菌rna聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。
三、載體構建不同
1、真核過表達質粒:,由238個氨基酸組成,分子量約為27kd。gfpgfp在包括熱、極端ph和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定,用甲醛固定後會持續發出螢光,但在還原環境下螢光會很快熄滅。
2、原核過表達質粒:以含目的基因的轉殖質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
5樓:匿名使用者
所有的質粒都是在細菌(原核)中構建和擴增的,但要在真核細胞中表達需要真核表達載體,要在原核細胞中表達需要原核表達載體。這兩種載體主要的區別是啟動子和polya加尾訊號的不同,乙個適合在原核細胞中表達,乙個適合在真核細胞中表達。
你需要哪種質粒取決於你最終需要在哪種細胞中表達目的蛋白,如果你要直接在大腸桿菌中表達目的蛋白,然後用純化的蛋白去處理黑色素瘤細胞,那你就應該用原核載體;如果你要在大腸桿菌中構建質粒,然後把質粒轉染到哺乳細胞中表達目的蛋白,你就應該用真核載體。但無論哪種載體,構建和擴增質粒都是在大腸桿菌中進行的。
至於抗性基因,因為所有質粒都要在大腸桿菌中擴增,所以都帶有大腸桿菌的某種耐藥基因。至於真核耐藥基因則不一定,原核表達載體肯定不需要真核耐藥基因,真核表達載體則有些有真核耐藥基因,有些沒有。另外,原核細胞的kana耐藥基因和真核細胞的neo耐藥基因是同乙個基因。
6樓:匿名使用者
質粒只是小型環狀dna分子,你指的真核、原核具體是什麼?
原核表達載體和真核表達載體的區別
7樓:威海博銳化機
一、表達載體不同:
原核表達載體構建重組表達載體:
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**,在t4dna連線酶作用下連線入載體。
真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
二、表達實現方式不同:
真核表達載體具有neo基因,可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
三、獲得目的基因方式不同:
pegfp-n1載體從結構上看,質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
原核表達載體獲得目的基因:
1、通過pcr方法:以含目的基因的轉殖質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法:提取總rna,以mrna為模板,逆轉錄形成cdna第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
8樓:匿名使用者
區別主要在表達重組元件還有基因標記。promoter,terminater是宿主識別的的,真核可能還需要enhancer,重組到基因組中的話,需要介導重組的序列。篩選標記絕大多數不一樣。
真核表達載體在宿主中以質粒形式存在的,可以複製。哺乳動物細胞裡沒有質粒,外源基因整合到基因組中的,所以不能擴增。由於整合多個位點而產生多拷貝。
如果說載體的重組,沒區別,都是一樣的酶切加連線。細菌轉化也一樣。真核載體在細菌中也可以進行增值。
表達的話,一般原核是直接轉化細菌通過ispg誘導進行表達,蛋白表達後的形式一般是通過包涵體或者是分泌型蛋白存在,這種蛋白如果是真核基因**,不一定擁有相應的蛋白生物活性,因為原核表達缺少真核轉錄後的蛋白修飾機制。但是原核表達的蛋白容易純化,很容易獲得純化蛋白做為免疫原等進行使用。
而真核表達則是通過脂質體或者是pei的等轉染試劑在體外通過和質粒形成複合體, 將質粒匯入細胞後進行瞬時表達。稱為瞬時表達的原因是因為質粒在真核細胞中不能擴增。並且不斷被細胞所降解,這種表達在一定的時間後就會消失。
除非質粒被整合進入細胞的基因組,通過質粒上帶的篩選標記,如g418等,通過篩選得到一株穩定表達你的目的蛋白的細胞轉殖。但是這種細胞轉殖的表達量相比瞬時表達會非常低甚至於檢測不到。真核表達的特點是所表達的蛋白一旦表達即擁有相應的生物學活性,因此真核瞬時轉染往往用於研究單個基因在細胞中的功能。
而不能用於純化蛋白。
此外,真核表達還有用於昆蟲細胞的桿狀病毒表面展示系統,其本質也是通過轉染含有目的基因的重組質粒(特殊質粒,專用於桿狀病毒表面展示系統)給昆蟲細胞,然後使用野生型的桿狀病毒或者是人工改造過的桿狀病毒來感染相應的細胞,來是病毒和質粒在昆蟲細胞體內發生重組,獲得目的基因,並且最終表達於病毒子的表面,所以成為表面展示系統。
9樓:匿名使用者
原核載體可以將真核基因表達,但是表達出來的蛋白是沒有活性的,因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。
總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾,表達後沒有活性,這時候就得在真核裡表......
10樓:匿名使用者
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子,終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達;
帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
真核表達質粒為什麼能在原核生物(大腸桿菌)表達
11樓:聽風
真核表達質粒
一般是穿梭質粒。
穿梭質粒一般都是人工構建的,由於穿梭質粒中存在既能夠適應在原核生物中表達的各種基因片段以及相關的酶切位點、選擇標記以及複製起點,也存在適應於真核生物中表達的相應片段及複製起點,所以穿梭質粒既能夠在真核生物中表達,也能在原核生物中表達.
原核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?真核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?謝謝!
12樓:匿名使用者
。。。你這問題問的,都夠寫一套叢書了。。。
載體構建時,如何區分質粒是真核表達還是原核表達,二者的啟動子分別有哪些?
13樓:山大煤老闆
這個做你就有點盲目了,我覺得你應該先確定你要原核表達,還是真和表達,確定後,在選擇質粒。正如你所說載體是可以構建的,所以質粒作為載體,其啟動子也是可以構建的,,現在實驗室往往自己構建所需要的載體進行表達,就是我需要什麼樣的質粒,我就構建什麼樣的質粒。
明白哇。質粒的啟動子不同之處在於原核和真核表達體系的不同,他們是特異針對不同的表達方式去構建的,有好多呢
14樓:匿名使用者
主要看啟動子吧,真核和原核啟動子的元件,很不同的.
原核: t7, sp6等;
真核: 35s等.
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