1樓：科學普及交流
藥敏試驗根據美國臨床標準委員會（nccls）推薦的k-b瓊脂法進行，藥敏紙片選擇中國生物製品鑑定所藥敏紙片，試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素：氨苄西林（amp），阿莫西林/克拉維酸（amc），頭孢噻吩（cft），頭孢噻肟（ctx），慶大黴素（gen），萘啶酸（nal），環丙沙星（cip），四環素（tbt），利福平（***），複方新諾明（**z）。藥敏結果判定標準按照nccls手冊2005版。
1. 操作方法：
（1）將待檢菌接種於普通營養瓊脂平板，37℃培養16～18小時，然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落，懸於3ml生理鹽水中，混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。
（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多餘菌液。用棉拭子塗佈整個m-h培養基表面，反覆幾次，每次將平板旋轉60度，最後沿周邊繞兩圈，保證塗均勻。
（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少於24mm，紙片中心距平皿邊緣不少於15mm。
在菌接種後15分鐘內貼完紙片。
（4）將平板反轉，孵育18～24小時後取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數公釐數並記錄（附表6）。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長，進入抑菌環，磺胺藥在抑菌環內出現輕微生長，這些都不作為抑菌環的邊緣。
結果判斷依據鑑定所藥敏紙片判定標準。
（5）每次藥敏試驗必須用atcc 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許範圍內測試菌株的結果才可以報告。atcc 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。
0.5麥氏比濁管配製方法：
0.048m bacl2 (1.17% w/v bacl2 . 2h2o) 0.5ml
0.36n h2so4 (1%, v/v) 99.5ml
將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處儲存。用前混勻。有效期為6個月。
2. 注意事項：
(1) 製備mh瓊脂平板應用直徑90mm平皿，在水平的實驗台上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養基），瓊脂凝固後塑料包裝放4℃儲存，在5 日內用完，使用前應在37℃培養箱烤乾平皿表面水滴。
傾注平皿前應用ph計測ph值是否正確(ph應為7.3)。ph過低會導致氨基糖苷類，大環內酯類失效，而青黴素活力增強。
(2) 藥敏紙片長期儲存應於－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應至於含乾燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出後,放置平衡到室溫後才可開啟，用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。 過期紙片不能使用, 應棄去。
(3) 不穩定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復合藥等, 應冷凍儲存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保證質控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍乾菌株接種含血的m-h平板復活。然後每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱儲存。每月取出一支，傳出細菌供常規用。
待用剩至最後一支，可傳種在m-h平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。
3.質量控制
質量控制方法 是用與常規實驗相同的操作方法，測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗佈方法等均同常規操作，測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。
如何做藥敏試驗
2樓：匿名使用者
用藥敏實驗進行藥物敏感度的測定，以便準確有效的利用藥物進行**。但由於藥敏試驗要求比較嚴格，條件比較高，僅僅在大中專院校或科研單位有條件的可以操作，一些養殖廠或一些門診難有條件進行藥敏試驗的操作。針對這個問題，農業部動物檢疫所青島易邦生物工程****動物疫病診療中心經過幾年的總結和實踐，逐漸總結出幾套適合基層進行藥敏試驗的操作方法。
目前，臨床微生物實驗室進行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法，稀釋法（包括瓊脂和肉湯稀釋法），抗生素濃度梯度法（e-test法），和自動化儀器等。
紙片擴散法
該法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數減少，從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時，紙片周圍抑菌濃度範圍內的菌株不能生長，而抑菌範圍外的菌株則可以生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈，不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度，並與該藥物對測試菌的mic呈負相關。
稀釋法稀釋法藥敏試驗可用於定量測試抗菌藥物對某一細菌的體外活性，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時，抗菌藥物的濃度通常經過倍比（lg2）稀釋，能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度（mic），乙個特定抗菌藥物的測試濃度範圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點（敏感、中介和耐藥）的濃度，同時也應該包含質控參考菌株的mic.
藥敏試驗的具體操作方法
3樓：匿名使用者
1藥敏實驗操作步驟:在超潔淨工作台內，先將滅菌好的培養基做好標記，無菌取病料（即：肝臟、心臟組織）一小塊，輕輕在滅菌的培養基上塗佈幾下（不要突破培養基），然後用接種環再密集劃線。
然後，將製備好的藥敏片分別按標記好的位置貼在培養基的表面。記錄好培養皿的標記及藥敏片的順序。最後，將培養皿放入37℃恆溫箱中培養8—12小時即可。
2藥敏實驗結果觀察:培養好後會發現細菌再培養基上均勻分布，同時會看到藥敏片周圍有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大，說明該雞群對這種藥物越敏感；抑菌圈小或沒有抑菌圈，說明該雞群對這種藥物不敏感或已經產生了耐藥性。
若在培養皿中出現一團一團的細菌時說明培養皿中有雜菌感染。
4樓：覃慧慄葉豐
有步驟你也沒有標準。人體和動物不一樣，你藥物濃度怎麼算。要做只能做e-tese法，k-b法沒價值。e-test法的紙片超級貴說。
單菌落-0.5麥氏濁度-塗佈mh平板-貼紙片-118小時後讀結果
怎麼做藥敏實驗
5樓：匿名使用者
藥敏試驗根據美國臨床標準委員會（nccls）推薦的k-b瓊脂法進行，藥敏紙片選擇中國生物製品鑑定所藥敏紙片，試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素：氨苄西林（amp），阿莫西林/克拉維酸（amc），頭孢噻吩（cft），頭孢噻肟（ctx），慶大黴素（gen），萘啶酸（nal），環丙沙星（cip），四環素（tbt），利福平（***），複方新諾明（**z）。藥敏結果判定標準按照nccls手冊2005版。
1. 操作方法：
（1）將待檢菌接種於普通營養瓊脂平板，37℃培養16～18小時，然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落，懸於3ml生理鹽水中，混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。
（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多餘菌液。用棉拭子塗佈整個m-h培養基表面，反覆幾次，每次將平板旋轉60度，最後沿周邊繞兩圈，保證塗均勻。
（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少於24mm，紙片中心距平皿邊緣不少於15mm。
在菌接種後15分鐘內貼完紙片。
（4）將平板反轉，孵育18～24小時後取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數公釐數並記錄（附表6）。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長，進入抑菌環，磺胺藥在抑菌環內出現輕微生長，這些都不作為抑菌環的邊緣。
結果判斷依據鑑定所藥敏紙片判定標準。
（5）每次藥敏試驗必須用atcc 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許範圍內測試菌株的結果才可以報告。atcc 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。
0.5麥氏比濁管配製方法：
0.048m bacl2 (1.17% w/v bacl2 . 2h2o) 0.5ml
0.36n h2so4 (1%, v/v) 99.5ml
將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處儲存。用前混勻。有效期為6個月。
2. 注意事項：
(1) 製備mh瓊脂平板應用直徑90mm平皿，在水平的實驗台上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養基），瓊脂凝固後塑料包裝放4℃儲存，在5 日內用完，使用前應在37℃培養箱烤乾平皿表面水滴。
傾注平皿前應用ph計測ph值是否正確(ph應為7.3)。ph過低會導致氨基糖苷類，大環內酯類失效，而青黴素活力增強。
(2) 藥敏紙片長期儲存應於－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應至於含乾燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出後,放置平衡到室溫後才可開啟，用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。 過期紙片不能使用, 應棄去。
(3) 不穩定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復合藥等, 應冷凍儲存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保證質控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍乾菌株接種含血的m-h平板復活。然後每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱儲存。每月取出一支，傳出細菌供常規用。
待用剩至最後一支，可傳種在m-h平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。
3.質量控制
質量控制方法 是用與常規實驗相同的操作方法，測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗佈方法等均同常規操作，測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。
6樓：畢芙笪庚
藥敏試驗可分為：藥敏紙片法，試管法，平皿法等。
藥敏紙片法：就是買廠家的藥敏紙片（也可自己做），自己製備培養基，然後採集病料塗板，通過抑菌圈的大小判斷藥物對病原菌的敏感性。
試管法：就是自己配製不同藥物的各中濃度的藥液，採集病料接種，通過試管中細菌的生長濁度判斷細菌的生長。
平皿法與試管法差不多，主要用在實驗室。
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病情分析 您好,藥敏實驗一般是較慢的。指導意見 藥敏實驗室通過培養解脲支原體然後加入藥物進行抑制,這個時間一般需要3天左右。支原體藥敏試驗報告單什麼意思啊 一般的臨床微生物實驗室採用高度敏感 s 中度敏感 i 耐藥 r 來分別表示實驗菌對抗菌藥物的敏感性。高度敏感 s 表示用某種藥物 某種細菌引起的...
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細菌藥敏試驗接種細菌的量怎麼控制
這肯定是有規定的。具體菌量確實很難保證，但是不需要很精確，測量或觀察菌液的渾濁情況接近0.5個麥氏比濁度即可。另外用紙片法做藥敏必須使用標準菌株做對照或者說質量控制，標準菌株在相同渾濁度菌液接種後所形成的抑菌環必須適度，否則該試驗不可靠。如果你想具體了解的話就看看 抗微生物藥物敏感性試驗規範 細菌藥...