1樓：歐陽俠
這肯定是有規定的。
具體菌量確實很難保證，但是不需要很精確，測量或觀察菌液的渾濁情況接近0.5個麥氏比濁度即可。
另外用紙片法做藥敏必須使用標準菌株做對照或者說質量控制，標準菌株在相同渾濁度菌液接種後所形成的抑菌環必須適度，否則該試驗不可靠。
如果你想具體了解的話就看看《抗微生物藥物敏感性試驗規範》
細菌藥敏實驗的操作步驟？
2樓：王植物
培養皿上十字劃線（待檢細菌）--塗佈均勻（注意，邊緣要塗，以免影響抑菌圈的性狀完整性）--放藥片（最好十字線交叉處一片、十字線上的四條**每條一片，這四片之間以及與**處的那片距離適中，大概不少於25mm，有字面朝上，都沒字在培養皿背面註明藥名）--恆溫箱培養約24h--觀察抑菌圈的邊緣是否清晰，抑菌圈直徑--記錄
記得不太清楚了，僅供參考
藥敏試驗的實驗步驟
3樓：十七
普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買，做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
藥敏試紙：購買或自製（詳見實驗準備）
細菌：待做藥敏試驗的細菌
儀器：接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭 2.1 藥敏片的準備：購買或自製
2.1.1 製備方法：
取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6公釐直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包紮。經15磅15-20分鐘高壓消毒後，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。
2.1.2 抗菌藥紙片製作：
在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入藥液0.25毫公升，並翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密蓋，如有條件可真空乾燥。
切勿受潮，置陰暗乾燥處存放，有效期3-6個月。
2.2 藥液的製備（用於商品藥的試驗）：按商品藥的使用**量的比例配製藥液；如商品藥百病消按其說明量**量0.
01%飲水，可按這個比例配製藥液，可取10毫克加入10毫公升的水中混勻。此稀釋液即為用於做藥敏試驗的藥液。 3.
1 藥敏片法
3.1.1 在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密，直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或pbs調到0.5個麥氏標準再塗佈均勻。
）3.1.2 將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。
為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規律的分布於平皿培養基上；一般可在平皿**貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱要記住。
3.1.3 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1 在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密。）
3.2.2 以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種藥物名稱。
每個平板可放4-6支小管。待分鐘後，分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。
3.2.3 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.3 打孔法：
該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品藥物的檢測。
3.3.1 在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密。）
3.3.2 以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（外徑為4公釐、孔徑與孔距均為3公釐，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。
3.3.3 加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4 將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
藥敏試驗的具體操作方法
4樓：匿名使用者
1藥敏實驗操作步驟:在超潔淨工作台內，先將滅菌好的培養基做好標記，無菌取病料（即：肝臟、心臟組織）一小塊，輕輕在滅菌的培養基上塗佈幾下（不要突破培養基），然後用接種環再密集劃線。
然後，將製備好的藥敏片分別按標記好的位置貼在培養基的表面。記錄好培養皿的標記及藥敏片的順序。最後，將培養皿放入37℃恆溫箱中培養8—12小時即可。
2藥敏實驗結果觀察:培養好後會發現細菌再培養基上均勻分布，同時會看到藥敏片周圍有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大，說明該雞群對這種藥物越敏感；抑菌圈小或沒有抑菌圈，說明該雞群對這種藥物不敏感或已經產生了耐藥性。
若在培養皿中出現一團一團的細菌時說明培養皿中有雜菌感染。
5樓：覃慧慄葉豐
有步驟你也沒有標準。人體和動物不一樣，你藥物濃度怎麼算。要做只能做e-tese法，k-b法沒價值。e-test法的紙片超級貴說。
單菌落-0.5麥氏濁度-塗佈mh平板-貼紙片-118小時後讀結果
藥物敏感試驗的實驗步驟
6樓：手機使用者
1.1普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買，做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基，如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
1.2藥敏試紙：購買或自製（詳見實驗準備）
1.3細菌：待做藥敏試驗的細菌
1.4接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯
1.5移液器、滴頭 2.1藥敏片的準備：購買或自製
2.1.1藥敏片的製備：
取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6公釐直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包紮。經15磅15-20分鐘高壓消毒後，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。
2.2.2抗菌藥紙片製作：
在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入藥液0.25毫公升，並翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，乾燥後即密蓋，如有條件可真空乾燥。
切勿受潮，置陰暗乾燥處存放，有效期3-6個月。各種常用藥的藥液配製詳見表-2
2.2藥液的製備（用於商品藥的試驗）：按商品藥的使用**量的比例配製藥液；如商品藥百病消按其說明量**量0.
01%飲水，可按這個比例配製藥液，可取10毫克加入10毫公升的水中混勻。此稀釋液即為用於做藥敏試驗的藥液。 3.
1藥敏片法
3.1.1在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密）
3.1.2將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。
為了使藥敏片與培養基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規律的分布於平皿培養基上；一般可在平皿**貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱要記住。
3.1.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.2牛津杯法
3.2.1在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密）
3.2.2以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上，輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，並在小管處標記各種藥物名稱。
每個平板可放4-6支小管。待分鐘後，分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養8-18小時，觀察結果。
3.2.3將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
3.3打孔法：該法較簡單，成本低，易操作，比較適用於商品藥物的檢測。
3.3.1在「超淨臺」中，用經（酒精燈）火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌塗佈到平皿培養基上。
具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌，以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布於平皿。（另：
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗佈於平皿培養基表面。要求塗佈均勻緻密）
3.3.2以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管（外徑為4公釐、孔徑與孔距均為3公釐，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養基上打孔，將孔中的培養基用針頭挑出，並以火焰封底，使培養基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結果）。
3.3.3加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4將平皿培養基置於37℃溫箱中培養24小時後，觀察效果。
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