1樓：江西南昌
參考。
一、製備用於轉殖cdna的mrna
mrna kits (qiagen）法。
2.磁珠法分離磨橡mrna
注意：一般需要做mrna完整性的檢測（檢查mrna在無細胞翻譯體系指導合成高分子量蛋白質的能力、mrna分子的大小等）；如果用於製備cdna文庫則還需要檢測mrna在細胞中的丰度。亂遊悔。
二、cdna第一鏈的合成。
1、oligo(dt)引導的dna合成法： 利用真核mrna分子所具有的poly(a)尾巴的特性，加入oligo(dt)短片段，由反轉錄酶合成cdna的第一鏈。
2、隨機引物引導的cdna合成法 (randomly primed cdna synthesis) :
根據許多可能的序列，合成出6-10個核苷酸長的寡核苷酸短片段(混合物),作為合成第一鏈cdna的引物。在應用這種混合引物的情況下，cdna的合成可以從mrna模板的許多位點同時發生，而不僅僅從3'-末端的oligo(dt)引物一處開始。
三、cdna第二鏈的合成。
1、自身引導合成法：
單鏈cdna的3'端能夠形成髮夾譁正狀的結構作為引物，在大腸桿菌聚合酶i klenow或反轉錄酶的作用下，合成cdna的第二鏈。
缺 點： 在以s1核酸酶切割cdna的髮夾狀結構時，會導致對應於mrna 5'端的地方的序列出現缺失和重排。 s1核酸酶的純度不夠時，會偶爾破壞合成的雙鏈cdna分子。
2、置換合成法。
原 理： 以第一鏈合成產物cdna:mrna雜交體作為切口平移的模板，rna酶h在雜交體的mrna鏈上造成切口和缺口，產生一系列rna引物，在大腸桿菌dna聚合酶i 的作用下合成cdna的第二鏈。
優點：a)合成cdna的效率高。
b)直接利用第一鏈的反應產物，不需純化。
c)避免使用s1核酸酶來切割雙鏈cdna
3、引物-銜接頭法。
2樓：網友
用所需基因的mrna反轉錄，再用pcr擴增，與運載體結合後倒入大腸桿菌培養基中儲存。
cdna文庫構建的方法與過程分別是什麼?
3樓：會哭的禮物
cdna 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mrna 經反轉錄形成的 cdna 片段與某種載體連線而形成的轉殖的集合。經典 cdna 文庫構建的基本原理是用 oligo(dt) 作逆轉錄引物，或者用隨機引物，給所合成的 cdna 加上適當的連線接頭，連線到適當的載體中獲得文庫。其基本步驟包括：
rna 的提取(例如異硫氰酸胍法，鹽酸胍—有機溶劑法，熱酚法等等，提取方法的選擇主要根據不同的樣品而定),要構建乙個高質量的 cdna 文庫，獲得高質量的 mrna 是至關輪嫌態重要的，所以處理 mrna 樣品時必須仔細小心。由於 rna 酶存在所有的生物中，並且能抵抗諸如煮沸這樣的物理環境，因此建立乙個無 rna 酶的環境對於製備優質 rna 很重要。在獲得高質量的 mrna 後，用反轉錄酶 oligo(dt) 引導下合成 cdna 第1鏈， cdna 第2鏈的合成(用 rna 酶 h 和大腸桿菌 dna 聚合酶 i,同時包括使用 t4 噬菌體多核苷酸酶和大腸桿菌 dna 連線酶進行的修復反應),合成接頭的加入、將雙鏈 dna 轉殖到載體中去、分析 cdna 插入片斷，擴增 cdna 文庫、對建立的 cdna 文庫進行鑑定。
這裡強調的是對載體的選擇，常規用的是 λ 噬菌者遊體，這是因為 λ dna 兩端具有由12個核苷酸的粘性末端，可用來構臘源建柯斯質粒，這種質粒能容納大片段的外源 dna.
電線一般的纏繞方法是什麼
多芯電線接頭纏繞方法 1 兩根多芯電線對接 請看下圖 如圖所示，首先將剝去絕回緣層的多股芯線拉 答直，將其靠近絕緣層的約1 3芯線絞合擰緊，而將其餘2 3芯線成傘狀散開，另一根需連線的導線芯線也如此處理。接著將兩傘狀芯線相對著互相插入後捏平芯線，然後將每一邊的芯線線頭分作3組，先將一邊的第1組線頭翹...
求煮麵方法，一般的，煮麵的一些方法。
好的，我來告訴你吧。如果湯麵的話，放點湯料做個簡簡單單的湯底，湯開了以後再下麵條。麵條怎麼熟？很簡單的，夾一根麵條起來，對著光看看，中間那根白色的線沒那麼粗了，就說明差不多額，你完全可以試試，根據自己喜歡的口感來。如果是拌麵，就更簡單了，弄個醬，加一些油。因為麵條容易糊。然後煮一鍋水，開了放麵條進去...
催產有幾種方法？引產的一般方法有哪些
墨魚有催產作用，可以養血 明目 通經 安胎 利產 止血等功能 另外，蓮子 蓖麻油炒雞蛋 燕麥 棉籽油 韭菜 薺菜 馬齒莧 海帶 兔肉等都有催生是作用。冬瓜薏仁水，我朋友預產期過了乙個月沒生，她媽就煲了一大煲冬瓜薏仁水給她喝，連續煲了3天就生了！如何使用蓖麻油進行自然催產 蓖麻油不能食用。經濟價值高，...