1樓：霓脦那些
一些載體（如puc系列質粒）帶有β-半乳糖苷酶（lacz）n端α片段的編碼區，該編碼區中含有多轉殖位點（mcs），可用於構建重組子。
這種載體適用於僅編碼β-半乳糖苷酶c端ω片段的突變宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性，但它們同時存在時，α片段與ω片段可通過α-互補形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補。
由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg（異丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落。而當外源dna插入到質粒的多轉殖位點後，幾乎不可避免地破壞α片段的編碼，使得帶有重組質粒的lacz-細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，稱為藍白斑篩選。
缺點。由於多種原因，一些白色菌落可能不包含所需的重組質粒。連線的 dna 可能不是正確的或未正確連線的，並且某些線性化載體可能被轉化，其末端「修復」並連線在一起，從而不會產生 laczα，也不會形成藍色菌落。
突變也會導致 α 片段不被表達。完全沒有載體的菌落也會出現白色，有時可能會在抗生素後顯示為衛星菌落已用完。
藍色菌落也可能包含插入物。當插入片段與 laczα 基因「符合讀框」且插入片段中不存在終止密碼子時，就會發生這種情況。
以上內容參考 百科-藍白斑篩選。
2樓：籍香之
首先我們需要知道是什麼讓菌落顯現出藍白兩色的。其實呢，白色吧，就是菌落本身的顏色，汗。是真的，看一下平板就知道了，菌落就是白色的。
那藍色呢？藍色確實是比較神奇的。藍色其實是β-半乳糖苷酶（β-galactosidase enzyme）分解x-gal產生的產物的顏色。
x-gal？什麼鬼。它的全名是5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷（不要試圖記住全名了，為了記住它，已經陣亡）。
產物又是啥，產物是一種叫做5-溴-4-氯靛蘭的藍色東東。
大腸桿菌本身是能夠表達β-半乳糖苷酶的（乳酸存在的前提下），所以正常的大腸桿菌無法進行藍白斑篩選，有乳酸存在的條件下，所有菌落都會分解x-gal產生藍色。能夠用來進行藍白斑篩選的菌株，我們管之叫作為β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。缺陷就意味這不正常。
也就是說能夠進行藍白斑篩選的菌株內的β-半乳糖苷酶的表達是不正常的（你好囉嗦）。β半乳糖苷酶可以拆分成兩個部分，n端和c端。β-半乳糖苷酶缺陷型菌株的基因組中含有表達β-半乳糖苷酶c端的基因，而n端（乙個146個氨基酸的短肽，即α肽鏈）的基因被安放到了表達的載體中。
n端基因經過改造，中間插入多轉殖位點。?
3樓：尹朶月
藍白斑篩選利用的是乳糖操縱子系統。野生大腸桿菌具有完整的乳糖操縱子系統，能把 x-gal變成藍色。實驗室用做轉化用的大腸桿菌缺乏乳糖操縱子系統中的lac-z基因。
這個基因被普遍設計在了各種各樣的載體上，並且在lac-z基因編碼區中間涉及了多轉殖位點，以供外源基因插入。而外源基因的插入又會導致lac-z基因被破壞。因此，沒有受到質粒轉入的感受態菌會被抗生素殺死，得到了空質粒的大腸桿菌不會被殺死，而且能夠將 x-gal變成藍色。
只有得到了具有插入片段的質粒的大腸桿菌不會被抗生素殺死，且不能分解x-gal，於是長出白斑。?
藍白斑篩選的藍白斑篩選原理
4樓：馬到功成
藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法： 是根據載體的遺傳特徵篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。現在使用的許多載體都帶有乙個大腸桿菌的dna的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的調控序列和前146個氨基酸的編碼資訊。
在這個編碼區中插入了乙個多轉殖位點（mcs），它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。
由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源dna插入到質粒的多轉殖位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。
如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。
5樓：修沃斯
樓上的複製貼上就算了吧 你說說你自己寫出來的東西你自己說的明白嗎？真是給組織增加困難。
有沒有高人能告訴我藍白斑篩的步驟，原理。謝謝。 有加分
6樓：只為不再錯過
在這之前先說一下做藍白斑篩選必備條件。
1）首先定義。
lacz：b(beta,打不出來，下同)-半乳糖苷酶。
lacz'：含有b-半乳糖苷酶的啟動子和5『端的編碼的a肽鏈。
那麼lacz'是沒有功能的（是指能表達沒有功能的蛋白質），只有和失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶重新互補形成完整的b-半乳糖苷酶後才具有功能，它能將底物xgal（5-溴-4-氯-3吲哚-b-半乳糖苷）水解，形成一種藍色化合物，菌落呈藍色；其靠近5『端有多轉殖位點，當插入外源目的基因後將會影響該基因的功能，導致無法形成完整功能的b-半乳糖苷酶而不能水解iptg底物，菌落呈白色。
通俗易懂的說法就是lacz'是左半邊，失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶是右半邊，組合在一塊形成有功能的酶。
2）明白以上這點，我們再往下說。
1.一般來說，做藍白斑，質粒載體上有lacz'
i，是lacz'的抑制基因，表達的阻遏蛋白和lacz'上的操作子區結合將會阻遏lacz'基因的表達，當有誘導物，iptg（異丙基-b-d-硫代半乳糖苷）與阻遏蛋白結合後，將使阻遏蛋白脫離操作子，從而使lacz'正常表達。
3.抗藥基因，如amp，用於篩除未將載體轉入了的宿主細胞，這是前提，否則鑑定是沒有意義的。
4.而宿主應該具備的條件是具有失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶的一種突變體，即前文說的右半邊。
3）步驟如下：
1.將目的基因插入lacz'靠近5『端有多轉殖位點，是否成功插入有待藍白斑篩選鑑定。
2.通過一定的方法，如cacl2誘導法將目的基因轉入宿主菌（失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶的一種突變體）
3.將宿主菌至於含有iptg，xgal，以及抗生素amp固體培養基中培養。
4.形成白色菌斑，說明目的基因插入了多轉殖位點，導致lacz』的基因功能受到影響，與失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶組合後不能水解xgal，菌落呈白色。形成藍色菌斑，說明目的基因沒有成功插入多轉殖位點，lacz'功能正常，與失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶組合後能水解xgal，生成藍色化合物，菌斑呈藍色。
5.這裡不存在由於質粒未能成功轉入宿主而導致的xgal不水解形成白色菌落的可能，因為未能成功匯入質粒的宿主菌將會因為缺乏amp抗性而被殺死。
求助，多肉上的白斑是什麼，求助多肉白斑是什麼
上圖，沒圖不好說。白斑可能是出錦了，也可能是病害。求助多肉白斑是什麼 建議仔細檢查所有的肉肉葉片背面，根部，葉片生長點和杆子交接的地方，長蟲的全部隔離。可以看見的蚧殼蟲用牙籤或鑷子處理完，然後全部用藥 多肉上的白斑白點是什麼 多肉植物葉片上的白斑，白點，主要是由於澆水時，直接向葉片噴水，或當頭葉芯澆...
白斑病都是什麼原因出現的，白斑病的發病原因都有哪些
1 陽光暴曬 陽光暴曬是引起白癜風的一大原因，長期受到了陽光的暴曬，黑色素細胞過度活躍，從而過早的衰亡，同時，細胞活躍會使得大量有害的中間物質生成，從而損害了黑色素細胞，引發白癜風。2 接觸化學物質 例如酚類化合物物質，在日常生活中，工作接觸比較頻繁的有 塑料 橡膠以及洗衣服等化合物，這些物質都和白...
我的藍顏知己，藍顏知己是什麼？
是的，他是喜歡上你了，但暫時還不是愛，要做的好的化以後也不會變成愛，你門是一種處於喜歡與愛之間的關係，這種關係要把握好的化會很好，要不好的話會有很大的後患。把握好的話就是一種純粹的欣賞，一種近距離的欣賞，這種關係也可以說是種曖昧。希望你能把握好自己，堅持自己的底線，那麼這種關係會很有好處的。你們兩個...