1樓：匿名使用者
蛋白上樣量一般指樣品中蛋白質量~50ug或30ug等~與loading buffer體積等無關~為什麼非要糾結蛋白濃度~
western blot 每孔的loading buffer 要一樣多嗎
2樓：匿名使用者
不是loading buffer要一樣多，是整體加到每個孔裡面的液體體積一樣。比如你的樣品每個孔加了20ul，在沒有樣品的孔，也需要補加20ul 1xloading buffer，這樣才能保證在電泳過程中每個孔受到的張力，最後獲得的條帶受到邊緣效應影響比較小。
做western bloting 如何確定蛋白樣品的體積
3樓：匿名使用者
做wb關鍵不是確定樣品體積，而是確定樣品的蛋白量吧。
如果每個樣品濃度不同，則需要統一乙個上樣量，體積上就會發生變化。所以最先需要先測定樣品中的蛋白濃度，根據之前的經驗先確定需要的總上樣量，例如是15ug還是25ug蛋白，然後計算每個樣品需要多少ul才能達到同樣的蛋白量。
為了保證泳道間均一度，可以補水，讓所有的樣品都在同樣的體積，再加loading實驗。
當然，最後還需要根據wb的結果判斷，用這些上樣量不足還是過多。
4樓：夢寒
測定蛋白的濃度，然後根據濃度確定上樣量，一般15ug蛋白質吧
western 加錯了dna的 loading buffer ，怎麼辦，會造成什麼樣的影響，跪求 謝謝
5樓：匿名使用者
肯定會影響的，會導致蛋白不能充分電泳。蛋白buffer含sds使蛋白帶上負電荷，這樣才能遮蔽電荷的影響，在sds膠中以分子量不同做電泳。所以，導致樣品中蛋白不能進行充分的電泳
6樓：匿名使用者
loading buffer 加錯了濃度
還是加錯了種類
loading buffer 不足，dna和溴酚藍會飄起來只要保證每乙個孔的loading buffer 濃度 體積 一致這次的實驗自身之中還是有可比性的
但是不能跟loading buffer 濃度正確的實驗組做比較
7樓：匿名使用者
那樣的話電泳基本就不能跑了，重新制樣吧。你要是再補加的話可能行，我不確定，沒弄過
loading buffer的量應該加多少，根據什麼來定 5
8樓：匿名使用者
我們實驗室所用的tae緩衝液是300ml的，取294ml的去離子水和6ml的tae，然後250ml用作緩衝液，50ml用來作膠，加入1%(0.5g)的瓊脂糖後搖勻加熱溶化後，冷卻一會加入一滴eb後，倒膠，就可以跑電泳了，一般tae是1*的吧，分子轉殖書上有的
跑western blot時，樣品蛋白濃度和加入抗體的濃度有什麼關係
9樓：廉迎楣
western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法
先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致
或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的目的
wb上樣前需要把loading buffer與樣品混勻嗎
10樓：南京金益柏生物科技****
主要決定loading buffer的濃度，dna樣品上樣buffer（商品化或者是實驗室自己配置的）主要是6x的，如果你上樣dna的體積是10ul的話，你只需要加入2ul的6x loading buffer後，混勻上樣即可。
western blot中蛋白樣品怎樣調節濃度
11樓：匿名使用者
先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致
或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的目的
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