1樓：風翼殘念
定量分析的吸收峰必須要穩定，還要有強的吸收。另外，還需要考慮干擾的問題。有關葉綠素定量分析方法很多，因此，在有其它靈敏方便的定量分析方法的情況下，一般不考慮這個吸收峰。
如果溶液中有多種吸光物質，則此混合液在某一波長下總吸光度等於各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。本實驗測定提取液中葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的。
2樓：z桑果
因為葉黃素和胡蘿蔔素在藍光區的吸收峰也很高，我們知道吸光度具有加和性，所以在藍光區測會干擾實驗結果。在紅光區則很小，可忽略。所以不能在藍光區測。
上圖是在http://wenku.baidu.
所截。
3樓：匿名使用者
理論上可以，但是實際上一般的儀器做不到。
葉綠素a和b在藍光區也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進行葉綠素a和b的定量分析，
4樓：風翼殘念
定量分析的吸收峰必須要穩定，還要有強的吸收。另外，還需要考慮干擾的問題。有關葉綠素定量分析方法很多，因此，在有其它靈敏方便的定量分析方法的情況下，一般不考慮這個吸收峰。
如果溶液中有多種吸光物質，則此混合液在某一波長下總吸光度等於各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。本實驗測定提取液中葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的。
5樓：匿名使用者
如果溶液中有多種吸光物質，則此混合液在某一波長下總吸光度等於各組分在相應波長
下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。本實驗測定提取液中葉綠素a、葉綠素b 和類胡
蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度a，並根據葉綠素a、葉綠素
b 及類胡蘿蔔素在該波長下的吸光係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、葉綠素b 時，為
了排除類胡蘿蔔素的干擾，所用單色光的波長應選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰。
葉綠素a、b在藍色區也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進行葉綠素的定量分析
6樓：清惑
首先，類胡蘿蔔素主要在藍紫光區有光吸收，而在紅光區沒有，選擇紅光區可以消除類胡蘿蔔素光吸收的影響；其次，進行定量分析需要吸收峰穩定和較強的光吸收，葉綠素在紅光區吸收帶偏向長波方面，且吸收頻寬，吸收峰值高，藍紫光區則相反。
7樓：匿名使用者
不可以，首先吸收峰太小，要精密儀器。其次因為小有較強干擾，費力不討好
ps法半夏與水半夏哪個更愛燕姿？
8樓：匿名使用者
錯了，葉黃素對藍色區也有吸收，所以結果會不準確。
9樓：匿名使用者
從原理上說未嘗不可，只要有吸收峰就行，但是一般都選取最高峰，因為在這個波段，吸收最明顯，浮動變化也最明顯，測定也會最精確。
能否用藍光區的最大吸收峰波長進行葉綠素a和b的定量分析？
10樓：匿名使用者
只要吸收存在差異，就應該能定量分析。但目前的難度是，如何把光量子的減少量和通過色素溶液試管後白紙片上暗區域的暗度對應量化，或許換成乙個光敏電阻屏聯網微機測定通過前後光量子的減少量就能解決！但受到實驗條件的限制，以及生物與物理配合能力的限制，我還無法親自做出來，但堅信這個思路的正確性。
葉綠素a，b有兩個吸收峰，為什麼選用紅光區最大吸收峰波長進行含量測定
11樓：大愛我
葉綠素吸收紅光和藍紫光，故有兩個吸收峰，光合色素還有類胡蘿蔔素，只吸收藍紫光，所以不能選藍紫光區測定，否則被類胡蘿蔔素干擾，只能用紅光。滿意就採納吧！
小麥葉片中葉綠體色素的含量
12樓：匿名使用者
實驗 8 葉綠體色素的定量測定
一、原理
根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長下測定其消光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。
根據朗伯–比爾定律，某有色溶液的消光度 d 與其中溶質濃度 c 和液層厚度 l 成正比，即：
d = kcl （ 17 – 1 ）
式中： k 為比例常數。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為 1cm 時， k 為該物質的比吸收係數。
各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的消光度而求得。
如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總消光度等於各組分在相應波長下消光度的總和，這就是消光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素 a 、 b 和類胡蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在 3 個特定波長下的消光度 d ，並根據葉綠素 a 、 b 及類胡蘿蔔素在該波長下的比吸收係數即可求出其濃度。在測定葉綠素 a 、 b 時，為了排除類胡蘿蔔素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰。
已知葉綠素 a 、 b 的 80 ％丙酮提取液在紅光區的最大吸收峰分別為 663nm 和 645nm ，又知在波長 663nm 下，葉綠素 a 、 b 在該溶液中的比吸收係數分別為 82.04 和 9.27 ，在波長 645nm 下分別為 16.
75 和 45.60 ，可根據加和性原則列出以下關係式：
d 663 = 82.04c a +9.27c b （ 17- – 2 ）
d 645 = 16.75c a +45.60c b （ 17 – 3 ）
式中： d 663 、 d 645 ——葉綠素溶液在波長 663nm 和 645nm 時的消光度；
c a 、 c b ——葉綠素 a 和 b 的濃度， mg/l 。
解方程組 17 – 2 、 17 – 3 得：
c a = 12.72d 663 – 2.59d 645 （ 17 – 4 ）
c b = 22.88d 645 – 4.67d 663 （ 17 – 5 ）
將 c a 與 c b 相加即得葉綠素總量 c t ：
c t = c a +c b =20.29d 645 + 8.05d 663 （ 17 – 6 ）
另外，由於葉綠素 a 、 b 在 652mn 的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收係數（均為 34.5 ），也可以在此波長下測定一次消光度（ d 652 ）而求出葉綠素 a 、 b 總量：
c t = （ d 652 × 1000 ）／ 34.5 （ 17 – 7 ）
在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法也可以同時測定出溶液中類胡蘿蔔素的含量。 lichtenthaler 等對 arnon 法進行了修正，提出了 80 ％丙酮提取液中 3 種色素含量的計算公式：
c a = 12.21d 663 – 2.81d 646 （ 17 – 8 ）
c b = 20.13d 646 – 5.03d 663 （ 17 – 9 ）
c x = （ 1000d 470 – 3.27c a – 104c b ）／ 229 （ 17 – 10 ）
式中： c a 、 c b ——葉綠素 a 和 b 的濃度。
c x ——類胡蘿蔔素的總濃度。
d 663 、 d 646 和 d 470 ——葉綠體色素提取液在波長 663 nm 、 646 nm 和 470 nm 下的消光度。
由於葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計算公式也有所不同。葉綠素 a 、 b 在 95 ％乙醇中最大吸收峰的波長分別為 665nm 和 649nm ，類胡蘿蔔素為 470nm ，可據此列出以下關係式：
c a = 13.95d 665 – 6.88d 649 （ 17 – 11 ）
c b = 24.96d 649 – 7.32d 665 （ 17 – 12 ）
c x = （ 1000d 470 – 2.05c a – 114c b ） /245 （ 17 – 13 ）
二、實驗材料、試劑與儀器裝置
（一）實驗材料
新鮮植物葉片（或其他綠色組織）。
（二）試劑
通過葉綠體色素含量的測定，可以解決哪些生產實踐問題
13樓：有苦難言啊
實驗 8 葉綠體色素的定量測定
一、原理
根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長下測定其消光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。
根據朗伯–比爾定律，某有色溶液的消光度 d 與其中溶質濃度 c 和液層厚度 l 成正比，即：
d = kcl （ 17 – 1 ）
式中： k 為比例常數。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為 1cm 時， k 為該物質的比吸收係數。
各種有色物質溶液在不同波長下的比吸收係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的消光度而求得。
如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總消光度等於各組分在相應波長下消光度的總和，這就是消光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素 a 、 b 和類胡蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在 3 個特定波長下的消光度 d ，並根據葉綠素 a 、 b 及類胡蘿蔔素在該波長下的比吸收係數即可求出其濃度。在測定葉綠素 a 、 b 時，為了排除類胡蘿蔔素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰。
已知葉綠素 a 、 b 的 80 ％丙酮提取液在紅光區的最大吸收峰分別為 663nm 和 645nm ，又知在波長 663nm 下，葉綠素 a 、 b 在該溶液中的比吸收係數分別為 82.04 和 9.27 ，在波長 645nm 下分別為 16.
75 和 45.60 ，可根據加和性原則列出以下關係式：
d 663 = 82.04c a +9.27c b （ 17- – 2 ）
d 645 = 16.75c a +45.60c b （ 17 – 3 ）
式中： d 663 、 d 645 ——葉綠素溶液在波長 663nm 和 645nm 時的消光度；
c a 、 c b ——葉綠素 a 和 b 的濃度， mg/l 。
解方程組 17 – 2 、 17 – 3 得：
c a = 12.72d 663 – 2.59d 645 （ 17 – 4 ）
c b = 22.88d 645 – 4.67d 663 （ 17 – 5 ）
將 c a 與 c b 相加即得葉綠素總量 c t ：
c t = c a +c b =20.29d 645 + 8.05d 663 （ 17 – 6 ）
另外，由於葉綠素 a 、 b 在 652mn 的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收係數（均為 34.5 ），也可以在此波長下測定一次消光度（ d 652 ）而求出葉綠素 a 、 b 總量：
c t = （ d 652 × 1000 ）／ 34.5 （ 17 – 7 ）
在有葉綠素存在的條件下，用分光光度法也可以同時測定出溶液中類胡蘿蔔素的含量。 lichtenthaler 等對 arnon 法進行了修正，提出了 80 ％丙酮提取液中 3 種色素含量的計算公式：
c a = 12.21d 663 – 2.81d 646 （ 17 – 8 ）
c b = 20.13d 646 – 5.03d 663 （ 17 – 9 ）
c x = （ 1000d 470 – 3.27c a – 104c b ）／ 229 （ 17 – 10 ）
式中： c a 、 c b ——葉綠素 a 和 b 的濃度。
c x ——類胡蘿蔔素的總濃度。
d 663 、 d 646 和 d 470 ——葉綠體色素提取液在波長 663 nm 、 646 nm 和 470 nm 下的消光度。
由於葉綠體色素在不同溶劑中的吸收光譜有差異，因此，在使用其他溶劑提取色素時，計算公式也有所不同。葉綠素 a 、 b 在 95 ％乙醇中最大吸收峰的波長分別為 665nm 和 649nm ，類胡蘿蔔素為 470nm ，可據此列出以下關係式：
c a = 13.95d 665 – 6.88d 649 （ 17 – 11 ）
c b = 24.96d 649 – 7.32d 665 （ 17 – 12 ）
c x = （ 1000d 470 – 2.05c a – 114c b ） /245 （ 17 – 13 ）
二、實驗材料、試劑與儀器裝置
（一）實驗材料
新鮮植物葉片（或其他綠色組織）。
（二）試劑
• 95 ％乙醇（或 80 ％丙酮）。
• 石英砂。
• 碳酸鈣粉。
（三）儀器裝置
分光光度計，研缽 1 套，剪刀 1 把，玻棒， 25 ml 棕色容量瓶 3 個，小漏斗 3 個，直徑 7 cm 定量濾紙，吸水紙，擦鏡紙，滴管，電子天平（ 0.01 g 感量）。
三、實驗步驟
1. 取新鮮植物葉片，擦淨組織表面汙物，剪碎（去掉中脈），混勻。
2. 稱取剪碎的新鮮樣品 0.3 g ，共 3 份，分別放入研缽中，加入少量石英砂和碳酸鈣粉及 2 ～ 3 ml95% 乙醇（或 80% 丙酮）研成勻漿，再加乙醇 10 ml ，繼續研磨至組織變白，靜止 3 ～ 5 min 。
3. 取濾紙 1 張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗中，過濾到 25ml 棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次，最後連同殘渣一起倒入漏斗中。
4. 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用乙醇定容至 25 ml ，搖勻。
5. 把葉綠體色素提取液倒入比色杯內。以 95 ％乙醇為空白，在波長 665 、 649 和 470 nm 下測定消光度。
6. 按公式 17 – 11 、 17 – 12 、 17 – 13 （如用 80 ％丙酮，則按公式 17 – 8 、 17 – 9 、 17 – 10 ）分別計算葉綠素 a 、 b 和類胡蘿蔔素的濃度（ mg/l ）， 17 – 11 、 17 – 12 式相加即得葉綠素總濃度。
四、結果計算
求得色素的濃度後再按下式計算組織中各色素的含量（用每克鮮重或乾重所含葉綠體色素的毫克數表示）：
（ mg/g ）
[ 注意事項 ]
1. 為了避免葉綠素的光分解，操作時應在弱光下進行，研磨時間應盡量短些。
2. 葉綠體色素提取液不能渾濁。可在 710 或 750 nm 波長下測量消光度，其值應小於當波長為葉綠素 a 吸收峰時消光度值的 5 ％，否則應重新過濾。
3. 用分光光度計法測定葉綠素含量，對分光光度計的波長精確度要求較高。如果波長與原吸收峰波長相差 l nm ，則葉綠素 a 的測定誤差為 2 ％，葉綠素 b 為 19 ％，使用前必須對分光光度計的波長進行校正。
校正方法除按儀器說明書外，還應以純的葉綠素 a 和 b 來校正。
4. 在使用低檔型號分光光度計（如： 72 、 125 、 721 型等）測定葉綠素 a 、 b 含量時，因儀器的狹縫較寬，分光效能差，單色光的純度低（± 5 ～ 7 nm ），與高中檔儀器如島津 uv-120 、 uv-240 等測定結果相比，葉綠素 a 的測定值偏低，葉綠素 b 值偏高， a ／ b 比值嚴重偏小。
因此，使用時必須用高檔分光光度計對低檔的分光光度計進行校正。
[ 思考題 ]
1 ．葉綠素 a 、 b 在藍光區也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進行葉綠素 a 、 b 的定量分析 ? 為什麼 ?
2 ．為什麼提取葉綠素時乾材料一定要用 80 ％的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提取？
【附註】 葉綠體色素簡便提取方法
採用上述研磨方法提取葉綠體色素，既費工費時，又容易出現誤差。為此，可採用乙醇–丙酮混合液浸泡法。其方法是，將待測葉片剪碎，裝入具塞刻度試管中，加入乙醇–丙酮混合液（ 1 ∶ l ， v ／ v ） 10 ml ，使葉片完全浸入液體之中，加蓋。
放置於暗處，如能置於 30 ～ 40 ℃溫箱中更好。當葉片完全變白時即可比色。此法簡便易行，重現性好，尤其適用於大量樣品的測定。
最好是在浸泡過程中輕輕搖動幾次。
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