1樓：匿名使用者
構建轉殖載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大
量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建轉殖載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建轉殖載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，轉殖載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
為什麼要先構建轉殖載體再用表達載體
2樓：匿名使用者
構建轉殖載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建轉殖載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建轉殖載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，轉殖載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
3樓：匿名使用者
先構建轉殖載體再構建表達載體並不是乙個必須的選擇，如果你的擴增pcr目的條帶很亮，而且單一性很好，我建議你可以直接轉殖進入表達載體。
很多人選擇先構建轉殖載體，是因為在擴增基因時目的條帶模糊，特異性不好，這樣將基因連線到轉殖載體上就可以便於挑去單轉殖進行測序，增加測序的準確度，從而確認自己轉殖基因序列的正確性。單純的pcr產物往往是一些各種pcr片段的混合物，直接送過去測序，往往導致測序訊號峰很雜，有時候並不能測出想要的訊號序列。同時儲存的pcr片段比較容易降解，而構建好轉殖載體後形成的質粒是很容易擴增和儲存的。
先構建轉殖載體，一是為了便於測序，確認轉殖序列正確，二是為了便於基因pcr片段的儲存。
4樓：匿名使用者
你最早的目的基因、質粒什麼的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先轉殖，把它變多，再做實驗，去表達
5樓：匿名使用者
這樣才能選取合適的轉殖載體，提高轉殖效率，增大表達量，從而高效的得到所需的表達產物。
構建質粒表達載體為什麼要先連t載再連pmv261?
6樓：
先連線t載體是為了提高轉化效率
一般來說市面上**的t載體都進行了優化，容易連線片段（也就是效率較高），因此構建表達載體時有時會先連線t載體。同時t載體的測序引物比較明確（商業化的緣故），因此測序也方便一些。更重要的是，t載體往往設計了藍白斑篩選的功能，插入片段的載體會呈現白色，這樣也容易區分驗證，不用每個單菌落都拿去做colony pcr或提質粒酶切驗證。
當然也不是絕對的，我們實驗室就經常直接把片段酶切後連線表達載體，不經過t載體這一步，其實影響並不大。如果你的情況比較特殊（比如片段較大，或是對應的表達載體拷貝數較低等），可以考慮連線t載體，不然的話不是非常必要。
轉殖載體與表達載體的區別
7樓：匿名使用者
一、原理不同
1、轉殖載體：採用從病毒、質粒或高等
生物細胞中獲取的dna作為轉殖載體，在載體上插入合適大小的 外源dn**段，並注意不能破壞載體的自我複製性質。將重組後的載體引入到宿主細胞中，並在宿主細胞中大量繁殖。
2、表達載體：在轉殖載體基本骨架的基礎上增加表達元件(如啟動子、rbs、終止子等)，使目的基因能夠表達的載體。
二、要求不同
1、轉殖載體：能在宿主細胞中複製繁殖，而且最好要有較高的自主複製能力；容易進入宿主細胞，而且進入效率越高越好；容易從宿主細胞中分離純化出來， 這才便於重組操作。
2、表達載體：常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端（多為黏性末端，也有平末端），採用dna連線酶連線，匯入生物體實現表達。
三、組成部分不同
1、轉殖載體：病毒、質粒或高等生物細胞。
2、表達載體：目的基因、啟動子、終止子、標記基因。
8樓：匿名使用者
轉殖載體一般是原核細菌 將需要轉殖的基因與轉殖載體的質粒相連線 在匯入原核細菌內 質粒會在原核細菌內大量複製 形成大量的基因轉殖 被轉殖的基因不一定會表達 但一定被大量複製
而表達載體是一些用於工程生產的細菌 他們被匯入目標基因 這些目標基因會在此類細菌中得到表達 生產出我們需要的產物 匯入的基因是有轉殖載體產出的
原核表達目的基因為什麼要先轉殖到轉殖載體上去
9樓：化驗所
如果不轉殖如載體，基因本身是一段dna，很難轉染到受體細胞中，即使轉入受體細胞，也不能篩選轉染成功的細胞。
為什麼要進行亞轉殖？基因已經轉殖到T載體上了，想表達它
t載體一般是轉殖載體，需要轉殖到表達載體，用相應的啟動子啟動表達 t載體不是表達載體。直接轉殖和亞轉殖的區別 亞轉殖是轉殖的成果中進行在培養的過程。兩者區別在於亞轉殖為內轉殖的再選擇過程。轉殖容是英文 clone 或 cloning 的音譯，而英文 clone 則起源於希臘文 klone 原意是指以...
為什麼基因表達載體的構建是基因工程的核心
因為目的基因要靠運載體進入受體細胞，然後目的基因才能在受體細胞中表達。所以基因表達載體的構建是基因工程的核心 下列關於基因表達載體的構建描述錯誤的是 a 基因表達載體的構建是基因工程的核心b 基因表達載體 a 基因表達載體使目的基因在受體細胞中穩定存在並且可以遺傳給下一代並表達和發揮作用，是基因工程...
為什麼構建的真核表達載體在真核細胞中不表達
有的時候在不同的表達體系裡面對蛋白的表達量是有影響的。當構建完成後攜帶有訊號肽的時候，一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除訊號肽序列值後，直接表達成熟肽，表達水平明顯提高。所以說構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白是完全有可能的。是在真核生物細胞中的基因表達載體的元件麼？如果是，元...