比濁法單細胞菌生長曲線的測定應該注意哪些問題

2021-03-04 05:51:05 字數 3933 閱讀 5347

1樓:匿名使用者

以od600為例說明。

1、液體培養基配製時記得過濾,將不溶物去除。

2、培養基滅菌後可能還會有沉澱出現,無菌過濾。

3、滅菌後的空白培養基的顏色盡量淺,否則影響檢測效果。

4、要設平行樣。

5、培養基量要多,否則檢測幾次後就沒了;

6、分光光度計要預熱30分鐘以上;

7、分光光度計要保持乾燥。

8、od值不能超過1.0,所以要將樣品適當稀釋。

如何利用比濁法測定細菌的生長曲線,應注意哪些問題

2樓:聽風

(一)實驗目的

了解細菌生長曲線的持點及測定原理,學會用比濁法測定細菌的生長曲線。

(二)實驗原理

將一定數量的細菌,接種於適宜的液體培養基中,在適溫下培養,定時取樣測數,以菌數的對數為縱座標,生長時間為橫座標,作出的曲線稱為生長曲線。該曲線表明細菌在一定的環境條件下群體生長與繁殖的規律。一般分為延緩期、對數期、穩定期及衰亡期四個時期,各時期的長短同菌種本身特徵、培養基成分和培養條件不同而異。

比濁法是根據細菌懸液細胞數與混濁度成正比,與透光度成反比關係,利用光電比色計測定細胞懸液的光密度(即od值),用於表示該菌在本實驗條件下的相對生長量。

實驗設正常生長、加酸抑制和加富培養等三種處理,以了解細菌在不同生長條件下的生長情況。

(三)實驗器材

1. 活材料:大腸桿菌(e.coli)。

2. 培養基和試劑:牛肉膏蛋白腖液體培養基14支(每支10 ml),濃縮5 倍的牛肉膏蛋白腖培養基1支。無菌酸溶液(甲酸:乙酸:乳酸=3:1:1)。

3. 器材:1 ml無菌吸管、搖床、冰箱、光電比色計、標籤等。

(四)實驗方法

方法一1. 接種:取13支裝有牛肉膏蛋白腖培養液的試管,貼上標籤(註明菌名、培養處理、培養時間、組號)。

按無菌操作法用吸管向每管準確加入0.2 ml的大腸桿菌培養液,接種後,輕輕搖盪,使菌體混勻。另一支不接種的培養管註明ck(對照)。

2. 培養:將接種後的培養管置於搖床上,在37 ℃下振盪培養。

其中9支培養管分別於培養的0、1.5、3、4、6、8、10、12和14 h後取山,放冰箱中貯存,待測定。加酸處理。取出經4 h培養的另二支培養管,按無菌操作法加入l ml無菌酸溶液,搖勻後放回搖床上,繼續振盪培養,於培養8 h和14 h後取出放冰箱中貯存,待測定。

加富營養物處理。餘下的二支培養管於培養6 h後取出,按無菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白腖培養液1 ml,搖勻後,繼續進行振盪培養,於培養8 h和14 h後取出,放入冰箱中貯存,待測定。

3. 比濁:將培養不同時間、形成不同細胞濃度的細菌培養液進行適當稀釋,使光密度值在0.

0-0.4範圍內,以未接種的牛肉膏蛋白腖液體培養基調零點,在光電比色計上,選用400-440 nm波長的濾光片進行比濁,從最稀濃度的菌懸液開始,依次測定。

方法二將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白腖培養液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內)。37 ℃下振盪培養,分別在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14 h取出,以未接種培養液調零點,在光電比色計上比色。

比色時應自製乙個暗盒將培養管和比色槽罩住,以形成乙個暗室。

(五)繪製曲線

以細菌懸液的光密度值(od)為縱座標,培養時間為橫座標,給出大腸桿菌在正常生長、加酸處理和加富培養三種條件下的生長曲線。

如果我們將上述培養0,1.5,3,4,6,8,10,12,14 h的細菌懸液用稀釋平板測數法進行測數,測出不同時間的含菌數,以菌懸液比濁的光密度值為橫座標,以細菌的數量為縱座標,繪製一標準曲線,這樣在測得了任一培養時間的菌懸液光密度值後,就可以在此標淮曲線上查出含菌數。這種方法已在工業上廣泛採用,它可以節省許多稀釋平板測數的時間, 直接用比濁法測得的光密度值查標準曲線以了解各個培養時期的菌數消長情況。

比濁法測生長曲線與活菌計數法有什麼區別

3樓:歐陽俠

比濁法只能測定比較濃的菌液,通過吸光度值大概估算菌懸液中的菌量,並不是非常準確。活菌計數是通過培養後,計數細菌的菌落形成個數,要求菌液中的菌量比較低,否則培養後菌落長成一片就無法計數了。

生長曲線怎麼測定?

4樓:匿名使用者

一:細菌生長曲線的測定

1 目的

1.1 了解細菌生長曲線特點及測定原理

1.2 學習用比濁法測定細菌的生長曲線

2 原理

將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中,在適宜的條件下進行培養,定時測定培養液中的菌量,以菌量的對數作縱座標,生長時間作橫座標,繪製的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同,一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。

這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線,可了解各菌的生長規律,對於科研和生產都具有重要的指導意義。

測定微生物的數量有多種不同的方法,可根據要求和材料

3.1菌種

大腸桿菌

3.2培養基

肉膏蛋白腖培養基

3.3 儀器和器具

721分光光度計,比色杯,恆溫搖床,無菌吸管,試管,三角瓶。

4 流程

種子液→標記→接種→培養→測定

5 方法

5.1種子液製備

取大腸桿菌斜面菌種1支,以無菌操作挑取1環菌苔,接入肉膏蛋白腖培養液中,靜止培養18h作種子培養液。

5.2標記編號

取盛有50ml無菌肉膏蛋白腖培養液的250ml三角瓶11個,分別編號為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接種培養

用2ml無菌吸管分別準確吸取2ml種子液加入已編號的11個三角瓶中,於37℃下振盪培養。然後分別按對應時間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養結束時一同測定od值。

5.4生長量測定

將未接種的肉膏蛋白腖培養基傾倒入比色杯中,選用600nm波長分光光度計上調節零點,作為空白對照,並對不同時間培養液從0h起依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白腖液體培養基適當稀釋後測定,使其od值在0.10.~0.

65以內,經稀釋後測得的od值要乘以稀釋倍數,才是培養液實際的od值。

6 結果

6.1 將測定的od值填入下表:

時 間(h) 對照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值(od600)

6.2 以上述**中的時間為橫座標,od600 值為縱座標,繪製大腸桿菌的生長曲線。

細菌的生長曲線如何確定,有何意義

5樓:匿名使用者

細菌生長曲線(bacterial growth curve)是專指單細胞微生物的。它是將少量的單細胞微生物接種純種到一定容積的液體培養基後,在適宜的條件下培養,定時取樣測定細胞數量。以細胞增長數目的對數做縱座標,以培養時間做橫座標,繪製的一條曲線,這條曲線稱為細菌的生長曲線。

生長曲線一般包括了細菌的生長繁殖的4個時期:遲緩期,對數期,穩定期,衰亡期,反映了細菌數量、生長狀況和代謝情況等多種重要指標,可以參照生長曲線,根據需要控制微生物的生長,來達到你需要的效果。

6樓:人生如夕陽

細菌的生長曲線有4個時期:調整期,對數期,穩定期,衰亡期.它表示了細菌生長過程中各個過程的情況,每個時期都有自己特定的優勢微生物.

你可以參照生長曲線,根據你的需要控制微生物的生長,來達到你需要的效果.

7樓:呃呃呃呃這個嘛

確定方法:

將少量的單細胞微生物接種純種到一定容積的液體培養基在適宜的條件下培養

定時取樣(至少有5-6個時間點),用od600(optical density)測定細胞數量

以細胞增長數目的對數做縱座標,以培養時間做橫座標,繪製一條曲線.

意義:生長曲線反映了細菌數量、生長狀況和代謝情況等多種重要指標

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