免疫共沉澱兩個抗體需要不同種源嗎

2021-03-04 04:44:07 字數 3524 閱讀 6056

1樓:神級人氏

不需要。或者說需要分開乙個個證明。用乙個抗體去做ip,然後分別用3個抗體做ib,看你抓下的蛋白是否是3個蛋白複合物。

抗體(antibody)指機體的免疫系統在抗原刺激下,由b淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布於組織液及外分泌液中。 抗體通常由一些基礎單元組成,每乙個抗體包括:

兩個長(大)的重鏈,以及兩個短(小)的輕鏈。而輕鏈和重鏈之間以雙硫鍵連線。輕鏈和重鏈又分為可變區和恆定區,而不同型別的重鏈恆定區,將會導致抗體種型的不同。

求助,免疫共沉澱第一抗體應加多少較為合適

2樓:

不需要。或者說需要分開乙個個證明。用乙個抗體去做

ip,然後分別用3個抗體做ib,看你抓下的蛋白是否是3個蛋白複合物。

抗體(antibody)指機體的免疫系統在抗原刺激下,由b淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布於組織液及外分泌液中。 抗體通常由一些基礎單元組成,每乙個抗體包括:

兩個長(大)的重鏈,以及兩個短(小)的輕鏈。而輕鏈和重鏈之間以雙硫鍵連線。輕鏈和重鏈又分為可變區和恆定區,而不同型別的重鏈恆定區,將會導致抗體種型的不同。

文獻中常有western blot和免疫沉澱結合在一起做的圖,可是在下看不同,請幫忙看看這種圖怎麼看呀?

3樓:匿名使用者

圖頂部的「+」和「-」分別代表是否表達載體蛋白以及載體蛋白的相關資訊;

一般標有"tcl" "wcl" "lysates"或"ib:**"代表了對相對應過表達載體的表達情況的檢測(如果沒有表達那麼免疫沉澱就白做了)"anti-**"和"ib:**"裡的「**」則是顯出條帶的抗體,一般與過表達載體的標籤對應,比如「ha」或者「myc」,「gfp」等等,比如第乙個圖中,用ha的抗體顯出了1、3、4泳道帶ha標籤的rock2,說明rock2有表達;

最重要的就是剩下的ip圖了,ip圖一般都有兩個,乙個用來說明沉澱下來了蛋白1,另乙個圖用來說明沉澱下來了與蛋白1存在相互作用的蛋白2。以第乙個圖說明,「ip:anti-myc」是說沉澱蛋白1用的抗體是「myc」,因此帶myc標籤的mdpr2作為蛋白1被沉澱下來,跑膠後用myc的抗體顯出了條帶,同一塊膠轉的膜再用ha的抗體可顯出與蛋白1有相互作用,一同被沉澱下來的蛋白2,因此圖1表示rock2與mdpr2存在相互作用。

有什麼不懂的還可以問我,謝謝!

免疫共沉澱的缺點

4樓:北京索萊寶科技****

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;

(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實驗前**目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若**不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。

免疫共沉澱:

免疫共沉澱(co-immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。

免疫共沉澱的注意事項

(1) 確保共沉澱的蛋白是由所加入的抗體沉澱得到的,而並非外源非特異蛋白,單轉殖抗體的使用有助於避免汙染的發生;

(2) 要確保抗體的特異性,即在不表達抗原的細胞溶解物中新增抗體後不會引起共沉澱;

(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中,而不是由於細胞的溶解才發生的,這需要進行蛋白質的定位來確定。

5樓:▆▆▆丈

(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;

(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

(3)必須在實驗前**目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若**不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

(4)靈敏度沒有親和色譜高。

染色質免疫共沉澱的原理

6樓:手機使用者

檢測目標基因活性

在保持組蛋白和dna聯合的同時,染色質被切成很小的片斷,通過運用對應於乙個特定組蛋白標記的生物抗體,將目標片段(組蛋白發生特異標記的片段)沉澱下來。ip 是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的「protein a」特異性地結合到免疫球蛋白的fc片段的現象活用開發出來的方法(免疫磁珠結合proteina,proteina結合抗體fc段,抗體結合抗原即發生特異標記的組蛋白,這裡要注意組蛋白是和dna結合的,這樣就把目標組蛋白和dna的符合物沉澱下來了)。在將組蛋白與dna分離,用獲得的dna去做western blot ,從而檢測那些基因的組蛋白發生了修飾。

檢測已知蛋白的靶基因

在生理狀態下把細胞內的蛋白質和dna交聯在一起,超聲波將其打碎為一定長度範圍內的染色質小片段,然後通過所要研究的目的蛋白質特異性抗體沉澱此複合體,特異性地富集目的蛋白結合的dn**段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而明確蛋白與哪些基因相互作用。

目前多用精製的protein a預先結合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應後,beads上的prorein a就能吸附抗原達到精製的目的。實驗最需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同,免染能結合未必能用在ip反應。

建議仔細檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。其次,要注意溶解抗原的緩衝液的性質。

多數的抗原是細胞構成的蛋白,特別是骨架蛋白,緩衝液必須要使其溶解。為此,必須使用含有強介面活性劑的緩衝液,儘管它有可能影響一部分抗原抗體的結合。另一面,如用弱介面活性劑溶解細胞,就不能充分溶解細胞蛋白。

即便溶解也產生與其它的蛋白結合的結果,抗原決定族被封閉,影響與抗體的結合,即使ip成功,也是很多蛋白與抗體共沉的悲慘結果。再次,為防止蛋白的分解,修飾,溶解抗原的緩衝液必須加蛋白每抑制劑,低溫下進行實驗。每次實驗之前,首先考慮抗體/緩衝液的比例。

抗體過少就不能檢出抗原,過多則就不能沉降在beads上,殘存在上清。緩衝劑太少則不能溶解抗原,過多則抗原被稀釋。

elisa和免疫共沉澱有什麼不同?

7樓:匿名使用者

簡單地說elisa是檢測是否存在某物質(如某種蛋白),而免疫共沉澱是為了檢測目標蛋白與其他蛋白是否相互作用。elisa一般方法是將目的物質的抗體加入,再加入能夠結合該抗體的另一種被修飾的抗體,後者修飾部分是具有一種酶活性可將某種物質催化形成有色物質,因此顯色陽性反應說明存在目標物質。而免疫共沉澱是將蛋白x抗體結合在固定相上,將細胞非變性裂解後浸泡固定相,吸取沒有結合的雜質後檢測被結合組分,這樣所有在細胞中能結合x的蛋白質就一起被分離出來,因此可確定體內條件下蛋白x是否和其他蛋白相互作用。

8樓:匿名使用者

elisa 是酶聯免疫吸附檢測技術,是用來檢測抗原或抗體的一種技術

當人工合成一些人工抗原時,還可以檢測一些半抗原物質,如氯黴素,三聚氰胺,等等.而免疫共沉澱是用抗體將相應特定分子沉澱的同時,與該分子特異性結合的其他分子也會被帶著一起沉澱出來的技術。這種技術常用於驗證蛋白質之間相互特異性結合。

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1全部設籃球x元乙個,足球y元乙個。則 2x 3y 180 3x 2y 150 解這個二元一次方程組得 x 24 y 44 籃球24元乙個,足球44元乙個。因為三個足球 兩個籃球 180元 所以六個足球 四個籃球 360元 1 因為兩個足球 三個籃球 150元 所以六個足球 九個籃球 480元 2 ...

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