如何實驗證明乳糖確實可以誘導半乳糖苷酶的表達呢

2022-10-11 07:20:04 字數 647 閱讀 9063

1樓:

你提到的問題無非涉及到兩個點:

1、兩種酶之間是否存在聯絡(合成方面)2、兩種酶的合成是否需要其他蛋白因子(或小分子有機物)的介入。

(一)對於第乙個問題很好辦,分別用兩株菌基因敲除β-半乳糖苷酶、通透酶基因,再檢測細胞中是否存在(應該是大量存在)對應的另一種酶。如果存在,則說明兩者之間無關係,反之則說明有關係。

(二)對於第二個問題較麻煩。比較笨的方法是先用乳糖誘導一株菌產生上述兩種酶,提取菌株的總蛋白,然後用β-半乳糖苷酶、通透酶對應抗體pull-down去除這兩種蛋白後,用剩下的蛋白加入到無乳糖(但含葡萄糖)的啟動子-10區的鹼基突變株(啟動子活性與乳糖操縱子的活性一樣高,但是不需要camp-cap的啟用,故無乳糖存在時低水平表達,有乳糖存在時表達水平很高)中,檢測突變株中β-半乳糖苷酶、通透酶的含量。如果含量很高,則說明是有因子介導的,反之則說明不需因子介導。

但這種方案還有很多缺陷,如何向含細胞壁且很小的大腸桿菌中匯入這些蛋白因子,並保證這些蛋白質的活性;其次若為小分子有機物,為了排除其中的乳糖的干擾,需要剔除乳糖分子,用乳糖酶消化乳糖後用其對應的抗體剔除乳糖酶蛋白,但需要有乙份只加入半乳糖(乳糖分解產生)的對照組。

2樓:匿名使用者

用敲除xyz中某乙個的變異細菌來做實驗就可以。。。

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