1樓：匿名使用者
在插入序列2端用pcr連線上不同的酶切位點（和載體的位置相對），用酶處理pcr產物和載體，然後再連線就可以了。
2樓：匿名使用者
要麼你像樓上說的那樣，做定向轉殖；我想你的本意就是要避免換個引物再亞轉殖一次，所以你
內只能多篩一些轉殖容，可以用 m13f+你特異基因的f引物 批量做菌落pcr驗證（或m13r+特異基因的r），擴出條帶就是反向插入了。如果p了上百個轉殖還 沒有，勸你放棄吧，還是定向轉殖吧。
目的基因未連線到轉殖載體上這是為什麼？我用的轉殖載體是pmd-18！！！
3樓：匿名使用者
目的基因和載體比例最好再核對一下，連線時間放久一點試試
4樓：環良業雪
pmd19-t是一種高效轉殖pcr產物的專用載體，以puc19載體為基礎構建而成，具有同puc19載體相同的功能。
pcmv-sport6是一種真核表達載體。
第二題中，什麼是目的基因與載體之間的反向連線，為什麼避免這個可以提高重組質粒的比例？
5樓：匿名使用者
目的基因具有從起始密碼子到終止密碼子的方向性，必須正向連線才能獲得正確轉殖，構建的載體才能正確表達目的蛋白。
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