1樓:胖輝原版
差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉澱,改用較高的離心速度離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達到分離不同大小顆粒的目的。
密度梯度離心(density gradient centrifugation)
用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。密度梯度離心常用的介質為氯化銫,蔗糖和多聚蔗糖。
分離活細胞的介質要求:1)能產生密度梯度,且密度高時,粘度不高;2)ph中性或易調為中性;3)濃度大時滲透壓不大;4)對細胞無毒。
差速離心法和密度梯度離心法的區別
2樓:甜小糖
區別一:定義不同
差速離心法:差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。
收集沉澱,改用較高的離心速度離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達到分離不同大小顆粒的目的。
密度梯度離心法:用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度,將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部,通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。
區別二:原理不同
差速離心法:物體圍繞中心軸旋轉時會受到離心力f的作用。當物體的質量為 m、體積為v、密度為d、旋轉半徑為r、角速度為(弧度數/秒)時,可得:
f=mω2r 或者 f=v.d.ω2r 。
密度梯度離心法:不同顆粒之間存在沉降係數差時,在一定離心力作用下,顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。
區別三:轉速不同
差速離心法:用多個離心轉速。
密度梯度離心法:只用乙個離心轉速。
區別四:密度不同
差速離心法:是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分。
密度梯度離心:用此方法的物質密度有一定差異的。
3樓:從小就愛玩
差速離心法,這種離心方法只能將那些大小有顯著差異的組分分開!而密度梯度離心則是較為精細的分離手段,這種方法的關鍵是先在離心管中製備出蔗糖或氯化銫等介質的濃度梯度並將細胞勻漿裝在最上層,密度梯度的介質可以穩定沉澱成分,防止對流混合,在此條件下離心,細胞不同組分將以不同速率沉降並形成不同沉降帶。
4樓:yn桃李醉春風
一、密度梯度離心法和差速離心法的區別
1. 差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離,密度梯度離心中單一樣品組份的分離是借助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的。
2. 差速離心用兩個甚至更多的轉速,而密度梯度離心只用乙個離心轉速。
3. 差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大的組分,而密度梯度離心的物質是密度有一定差異的。
二、差速離心法
差速離心法是交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法。此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離。
1. 沉降係數
使用離心法時,大分子沉降速度的量度,等於每單位離心場的速度。或 s=v/ω2r,s 是沉降係數, ω 是離心轉子的角速度(弧度 / 秒), r 是到旋轉中心的距離, v 是沉降速度。沉降係數以每單位重力的沉降時間表示,並且通常為 1 ~ 200×10-13 秒範圍, 10-13 這個因子叫做沉降單位 s ,即 1s=10-13 秒,如血紅蛋白的沉降係數約為 4×10 -13 秒或 4s 。
大多數蛋白質和核酸的沉降係數在 4s 和 40s 之間,核醣體及其亞基在 30s 和 80s 之間,多核醣體在 100s 以上。
2. 差速離心法的優缺點
差速離心法的優點是樣品的處理量較大,可用於大量樣品的初分離。其缺點是分離複雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數多,操作繁雜。由於沉澱的多次清洗、溶解、再沉澱,容易引起中間損失,所以離心分辨力差。
實際分離時由於離心時的對流、擴散和收取沉澱時的汙染,對於一些沉降係數相差不大的組分無法進行完全的分離提純。產品的純度和**率都達不到上述理論值。因此差速離心法主要用於大量樣品的初步分離提純。
三、密度梯度離心法
密度梯度離心法又稱為區帶離心法,是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。
1. 分類
( 1 )差速區帶離心法:分離密度相差不大、重量和大小區分較大的樣品。 將樣品置於平緩的預先製好的密度梯度介質上,進行離心,較大的顆粒將比較小的顆粒更快地沉降。
通過梯度介質,形成幾個明顯的區帶(條帶)。這種方法有時間限制,在任一區帶到達管底之前必須停止離心。大小相同、密度不同的顆粒(如溶酶體、線粒體和過氧化物酶體)不能用本法分離。
( 2 )等密度區帶離心法:用於樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大的樣品分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關。離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液面上,或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管,通過離心形成梯度。
離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。
等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化銫 c s cl ,其密度可達 1.7 g/cm3 。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離復合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。
2. 密度梯度離心法的優缺點
優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性。
缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
5樓:匿名使用者
差速離心是每次用不同的轉速將混在一起但是比重不同的結構或物質分開(某速度離心一次分離出乙個),比如細胞器的分離;
密度梯度離心一般是一次離心讓混合物中比重不同的分成不同的層。比如dna半保留複製的實驗證據就是用這個方法
6樓:華
區別在於差速利用速度不同,而密度利用比重。
差速離心是每次用不同的轉速將混在一起但是比重不同的結構或物質分開(某速度離心一次分離出乙個),比如細胞器的分離;
密度梯度離心一般是一次離心讓混合物中比重不同的分成不同的層。
7樓:風辰平
兩者都是依靠離心力對細胞勻漿懸浮扔中的顆粒進行分離的技術.差速離心是一種較為簡便的分離法,常用於細胞核和細胞器的分離.因為在密度均一的介質中
差速離心法的密度梯度離心法和差速離心法
8樓:手機使用者
1:密度梯度離心中單一樣品組份的分離是借助於混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達到的;差速離心法是用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離
2:密度梯度離心只用乙個離心轉速,而差速離心用兩個甚至更多的轉速。
3:密度梯度離心的物質是密度有一定差異的,而差速離心是適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分
高手總結下高中生物差速離心法和密度梯度離心法分別用於什麼?具體~如製備細胞膜
9樓:匿名使用者
差速離心法(離心法):交替使用低速和高速離心,用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法.此法適用於混合樣品中各沉降係數差別較大組分的分離.
梯度離心法(濃度梯度):細胞內的物質具有一定的濃度,把細胞放入清水中,細胞吸水漲破.除去細胞內的其他物質,得到細胞膜.
請問噬菌體侵染細菌實驗用到差速離心法還是密度梯度離心法?請解釋一下,謝謝。
10樓:manman大魔羯
是離心,不是差速離心,差速離心用於分離細胞器
11樓:實打實結婚
那噬菌體實驗的離心方法是什麼,是差速離心嗎
請問一下密度梯度法和差速離心法分別是用來分離什麼的? 謝謝!!
12樓:匿名使用者
現在你知道答案了嗎……能不能解答我一下?我也想知道……
密度梯度離心法 應該怎麼操作?
13樓:匿名使用者
密度梯度離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。此法的優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性,並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。
此法的缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
密度梯度離心法又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種:
(1)差速區帶離心法:當不同的顆粒間存在沉降速度差時(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降係數差)。在一定的離心力作用下,顆粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介質的不同區域上形成區帶的方法稱為差速區帶離心法。
此法僅用於分離有一定沉降係數差的顆粒(20% 的沉降係數差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質,與顆粒的密度無關,大小相同,密度不同的顆粒(如線粒體,溶酶體等)不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質溶液,樣品液加在梯度介質的液面上,離心時,由於離心力的作用,顆粒離開原樣品層,按不同沉降速度向管底沉降,離心一定時間後,沉降的顆粒逐漸分開,最後形成一系列介面清楚的不連續區帶,沉降係數越大,往下沉降越快,所呈現的區帶也越低,離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束,樣品顆粒的密度要大於梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液,其最大密度和濃度可達1.28 g/cm3和60%。
此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間
(2)等密度區帶離心法:離心管中預先放置好梯度介質,樣品加在梯度液面上,或樣品預先與梯度介質溶液混合後裝入離心管,通過離心形成梯度,這就是預形成梯度和離心形成梯度的等密度區帶離心產生梯度的二種方式。
離心時,樣品的不同顆粒向上浮起,一直移動到與它們的密度相等的等密度點的特定梯度位置上,形成幾條不同的區帶,這就是等密度離心法。體系到達平衡狀態後,再延長離心時間和提高轉速已無意義,處於等密度點上的樣品顆粒的區帶形狀和位置均不再受離心時間所影響,提高轉速可以縮短達到平衡的時間,離心所需時間以最小顆粒到達等密度點(即平衡點)的時間為基準,有時長達數日。
等密度離心法的分離效率取決於樣品顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒大小和形狀無關,但大小和形狀決定著達到平衡的速度、時間和區帶寬度。
等密度區帶離心法所用的梯度介質通常為氯化絕cscl,其密度可達1.7 g/cm3。此法可分離核酸、亞細胞器等,也可以分離復合蛋白質,但簡單蛋白質不適用。
純化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度離心法,能得到比較純的病毒。其操作過程如下:
1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨後製成懸液,經反覆凍融3 次後,置- 20 ℃冰箱中,備用。
2、先以5000g離心15分鐘後,獲取上清夜,然後再20000g高速離心30分鐘後取上清夜。
3、接著10萬g超速離心2h,將沉澱用少量ste溶解。
4、先在超速離心管中加入5-8ml的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液,然後在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶,用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來,分別收集到不同的瓶內。
5、去蔗糖;用ste緩衝液適量稀釋純化的病毒,然後11萬g離心3h,用少量ste(根據沉澱的量決定加入多少)緩衝液把沉澱懸起,即最後獲得了純化的病毒。-20度凍純備用,用時可用分光光度計測定其病毒含量。
差速離心法與密度梯度離心法,差速離心法和密度梯度離心法的區別
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使用蔗糖密度梯度離心時,不同濃度的蔗糖為什麼會分層
當含有細小顆復粒的懸浮液靜置不動制時,由於重力場的bai作用使得懸du浮的顆粒逐漸下zhi 沉。粒子越重,下dao沉越快,反之密度比液體小的粒子就會上浮。微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小 形態和密度有關,並且又與重力場的強度及液體的粘度有關。象紅血球大小的顆粒,直徑為數微公尺,就可以在通常重力作...