1樓：華瑞創新生物
用細胞裂解試劑盒，應該可以，進口的比較貴，你可以打**問一下南京凱基國產的盒子能一能用
如何從細胞中提取蛋白質
2樓：句月聽風
（一）水溶液提取法
稀鹽和緩衝系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1-5倍,提取時需要均勻的攪拌,以利於蛋白質的溶解.提取的溫度要視有效成份性質而定.一方面,多數蛋白質的溶解度隨著溫度的公升高而增大,因此,溫度高利於溶解,縮短提取時間.
但另一方面,溫度公升高會使蛋白質變性失活,因此,基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作.為了避免蛋白質提以過程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸,碘乙酸等）.
下面著重討論提取液的ph值和鹽濃度的選擇.
1、ph值蛋白質,酶是具有等電點的兩性電解質,提取液的ph值應選擇在偏離等電點兩側的ph 範圍內.用稀酸或稀鹼提取時,應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化,從而導致蛋白質構象的不可逆變化,一般來說,鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液.
2、鹽濃度稀濃度可促進蛋白質的溶,稱為鹽溶作用.同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合,具有保護蛋白質不易變性的優點,因此在提取液中加入少量nacl等中性鹽,一般以0.15摩爾.
公升濃度為宜.緩衝液常採用0.02-0.
05m磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液.
（二）有機溶劑提取法
一些和脂質結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質和酶,不溶於水、稀鹽溶液、稀酸或稀鹼中,可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑,它們具的一定的親水性,還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液.但必須在低溫下操作.丁醇提取法對提取一些與脂質結合緊密的蛋白質和酶特別優越,一是因為丁醇親脂性強,特別是溶解磷脂的能力強；二是丁醇兼具親水性,在溶解度範圍內（度為10%,40度為6.
6%）不會引起酶的變性失活.
蛋白質提取方法比較
3樓：初芯_不變
1、超速離心法
此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處於不同密度梯度層內，達到彼此分離的目的。
2、選擇性沉澱法
其原理多根據各蛋白質理化特性的差異，採用各種沉澱劑或改變某些條件促使蛋白質抗原成分沉澱，從而達到純化的目的。常用的方法是鹽析沉澱法。
3、凝膠層析法
凝膠層析是利用分子篩作用對蛋白質進行分離。凝膠是具有三維空間多孔網狀結構的物質，經過適當的溶液平衡後，裝入層析柱。
4、離子交換層析法
離子交換層析的原理是利用一些帶離子基團的纖維素或凝膠，吸附交換帶相反電荷的蛋白質抗原。由於各種蛋白質的等電點不同，所帶的電荷量不同，與纖維素(或凝膠)結合的能力有差別。
5、親和層析
親和層析是利用生物大分子的生物特異性，即生物大分子間所具有專一親和力而設計的層析技術。例如抗原和抗體、酶和酶抑制劑(或配體)、酶蛋白和輔酶、激素和受體、igg和葡萄球菌蛋白a(spa)等物質間具有一種特殊的親和力。
4樓：鵝子野心
1.機械破碎法（勻漿）
1利用機械力將細胞破碎。常用的裝置：高速組織搗碎機，勻漿器，研缽等。
不同組織的特性來選擇不同的方法，動物的胰肝腦一般較柔軟，用普通勻漿器研磨即可，而肌及心肌組織較韌，需預先攪碎成勻漿。
2.超聲破碎法
1利用**頻率為15-25khz的超聲波在細胞液中產生的空化效應和機械效應將細胞膜破碎的方法，多用於細胞裂解。
2注意事項：（1）為了避免在溶液中產生泡沫，要將超聲探頭完全置於液面以下，並不接觸的前提下盡可能靠近容器底部。（2）應該使用塑料試管，避免使用玻璃試管。
（3）超聲劑量應由樣品量和菌體來決定，攻率可以在200-600w。過強的超聲波可導致多聚物降解和蛋白失活。如果超聲出現沉澱說明超聲功率太大。
（4）一般超聲5-10s，反覆多次。（4）將試管置於冰水中以避免蛋白質變性和失活。
3.反覆凍融法
1將細胞在-20度以下或液氮條件下冰凍，室溫溶解，反覆多次。
特點：成本低，操作簡便，過程緩慢，但不適用於對溫度比較敏感的蛋白質。
end4.表面活性劑裂解及酶解法
自溶法：利用自身的酶將細胞破使細胞內物質釋放出來。該法比較穩定，且蛋白不易分解。自溶過程中ph會有顯著的變化。
酶融法：利用生物酶使細胞成分溶於溶劑中。
3表面活性劑處理：通過破壞細胞膜磷脂雙分子層將胞內物質釋放出來。
如何提取細胞上清中的有意義蛋白
5樓：文帝寶寶
做細胞培液上清中的蛋白，應該用無血清培液。光牛血清中的蛋白就夠你分析的了，更何況多數分泌蛋白的量都是含量很少的。
蛋白質如何產生經過哪些細胞器，分泌蛋白質從合成到分泌，經過哪些細胞器或細胞結構
具體來說不同生物的細胞還是有區別的 大致上是細胞核出來的rna經過核醣體，由相應的密碼子產生氨基酸，再經過如內質網加工，最後由高爾基體分泌出體外 也有一定的加工作用 氨基酸通過脫水縮合形成肽鏈。蛋白質由一條或多條多肽鏈組成的生物大分子，每一條多肽鏈有二十 數百個氨基酸殘基不等 各種氨基酸殘基按一定的...
蛋白質的跨膜運輸方式有哪些，細胞內蛋白質的跨膜運輸有哪幾類
1，協助擴散與主動運輸的區分標準是不是濃度梯度 協助擴散和主動運輸都屬於載體介導的跨膜運輸方式，它們之間的關鍵區別在於實現跨膜轉運是否需要能量。協助擴散的動力來自於濃度梯度，故不需要能量。而主動運輸因為一般是逆濃度梯度或電化學梯度進行跨膜轉運，所以需要能量，其運輸過程所需能量 有三種 atp直接供能...
如何防止蛋白質在分離純化過程中變性
首先低copy溫是很重要的，比如純化在4度層析櫃中進行等可以減少蛋白的降解和變性。分離純化的條件對蛋白性質也有很大的影響，包括你的buffer的ph值，離子的濃度等，所以純化過程中要根據純化的蛋白來做相應的調整。如果條件允許，可以加入一點抑制蛋白降解的試劑，如 pmsf等 這要看你要純化的是什麼蛋白...