1樓：匿名使用者
果膠酶活性的檢測
[目的]
本檢測方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用於各種固體和液體果膠酶製劑。
[說明]
本方法適合於果膠酶的質量分析和質量控制領域。但不是本公司產品及其它公司產品的絕對活力的**，而各種酶製劑的最終的酶活力在良好的實驗操作下仍可發揮出更好的催化活力。
[原理]
果膠物質主要存在於植物初生壁和細胞中間，果膠物質是細胞壁的基質多醣。果膠包括兩種酸性多醣（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多醣（阿拉伯聚醣、半乳聚醣、阿拉伯半乳聚醣）。果膠酶本質上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進行半乳醛酸的定量,從而測定果膠酶活力。
[果膠酶活力單位定義]
1g(或1ml液體酶)酶粉,於50.0℃、ph3.5條件下,每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為乙個活力單位。
1. 試劑和儀器
*本標準所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花鉀
1.4 濃硫酸
1.5 果膠（sigma公司）
1.6 硫代硫酸鈉
1.7 碳酸鈉
1.8 可溶性澱粉
1.9 水浴鍋
1.10 碘量瓶
2. 試劑的製備
2.1 ph3.5的酸水
用醋酸將蒸餾水調至3.5
2.2 1%果膠溶液：
準確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻後過濾，定至100ml。
2.2 0.1n碘液：
準確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解後，加入2.54g碘，溶解後定容至100ml。
2.3 0.025mol/l硫代硫酸鈉：
準確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水後定容至1l
2.4 0.5%可溶性澱粉指示劑：
準確稱取可溶性澱粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1m碳酸鈉溶液：
準確稱取10.6g碳酸鈉，定容於100ml的水中
2.6 2n硫酸：
吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中
2.7 酶樣的製備
準確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，於50℃水浴浸取1小時，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經稀釋100倍。
3. 程式
3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（ph3.5），在50℃水浴中保溫反應1小時。
3.2 取出後加熱煮沸2~3min，冷卻後，補水至20ml。
3.3 取5ml反應液於100ml碘量瓶中，加1m碳酸鈉溶液1ml，0.1n碘液5ml，搖勻，具塞，於室溫暗處下放置20min。
3.4 取出後加2n硫酸2ml，立即用0.05n硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性澱粉溶液，繼續滴定至藍色消失為止。
3.5 空白試驗以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進行滴定。
3.6 每個酶樣最少做兩個平行樣。
4. 計算
4.1 將測得的各平行樣求od值的均值。
4.2 計算酶的活性單位依據以下公式
酶的活力= [(b-a)*n*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*w*60 ]
單位： u/g(ml)
式中： a：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫公升數。
b：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫公升數。
n：硫代硫酸鈉摩爾濃度。
0.5：1當量硫代硫酸鈉相當於0.5當量半乳糖醛酸。
20：反應液總體積
51：酶液體積以1ml計
52：吸取反應液
n：稀釋倍數
w：酶粉重量g或酶液體積ml
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