1樓:歐陽俠
細菌革蘭氏染色鏡檢其實很便宜,不同地區但收費會有比較大的差異,但都不貴,可能只要十元左右。不過只是革蘭氏染色,不一定能做出最後的診斷,也不一定能為臨床**提供支援。可能需要進行細菌學的培養,並進行藥敏實驗,當然這是臨床醫生根據實際需要來建議患者進行檢查的。
牙垢細菌革蘭染色**??
2樓:
牙垢中細菌很多,各類菌型都有,引起齲齒的菌主要是革蘭氏染色陰性的乳酸桿菌。
革蘭氏染色的步驟和原理
3樓:江南蜜汁
原理:革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌(g+)和革蘭氏陰性菌(g-)兩大類,是細菌學上最常用的鑑別染色法。該染色法之所以能將細菌分為g+菌和g-菌,是因為一般認為革蘭氏染色是基於細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。
步驟:(一)塗片固定
在乾淨的載玻片**滴加一滴蒸餾水,用接種環進行無菌操作,挑取培養物少許,置載玻片的水滴中,與水混合做成菌懸液並塗佈成直徑約1cm的薄層。
(二)染色
在固定過的塗片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液,染色液應完全覆蓋整個菌膜,染色1min。
(三)水洗
染色到一定的時間,拿住玻片使之成450角,用細小的水流把多餘的染料沖洗掉,被菌體吸附的染料則保留。
(四)媒染
加碘液覆蓋塗面染1 min。在媒染處理時,媒染劑與染料形成不溶性的化合物,可增加染料和細菌的親和力。
(五)水洗,用吸水紙吸去水分
用細小的水流緩慢沖洗塗片上的染色液,用吸水紙吸乾。
(六)脫色
加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色, 20 s~30 s後再進行水洗,吸去水分。
(七)復染
蕃紅染色液染色10 s後, 自來水沖洗。
(八)乾燥,鏡檢
染色的結果,革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。
擴充套件資料
標本乾燥後即進行固定,固定的目的有三個:
(1)殺死微生物,固定細胞結構。
(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上,防止標本水洗時被水沖洗掉。
(3)改變染料對細胞的通透性,因為死的原生質比活的原生質易於染色。
4樓:鵝子野心
操作步驟:
1 .塗片
將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。
2 .染色
( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。
( 2 )媒染滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鐘,水洗。
( 3 )脫色將載玻片上面的水甩淨,並襯以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20 一30 秒鐘,立即用水沖淨酒精。
( 4 )復染用番紅液染1 一2 分鐘,水洗。
( 5 )鏡檢乾燥後,置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。
( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片,作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。
原理:革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。
革蘭氏染色法(gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示:染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g 一表示。
細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚醣形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚醣含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。
革蘭氏染色需用四種不同的溶液:鹼性染料(basic dye )初染液;媒染劑(mordant ) ;脫色劑( decolorising agent )和復染液(counter stain )。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet )。
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95 %的酒精(ethanol )。復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成g +和g 一兩大類群,常用的復染液是番紅。
5樓:林與潘
一、 目的:在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
二、 原理:
6樓:張鈺濤
步驟:包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。
原理:染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色屬復染法。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法的重要意義是什麼
7樓:人生如夕陽
革蘭氏染色法不僅用來觀察細菌的形態,而且它還是細菌鑑定的重要方法,微生物的細胞小且透明,在普通光學顯微鏡下不易識別,必須對它們進行染色,使經染色後的菌體與背景形成明顯的色差,從而能更清楚地觀察到其形態和結構。因此,微生物染色技術是觀察微生物形態結構的重要手段。
革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是2023年由丹麥醫師gram創立的。革蘭氏染色法(gram stain)不僅能觀察到細菌的形態,而且還可將所有細菌區分為兩大類:
染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示;染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g-表示。細菌對革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚醣形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫-碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中肽聚醣含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫-碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。
8樓:瑣碎
重要意義:
為了研究細菌的形態,微生物學家發明了對細菌的染色,有用一種染色劑的稱單染,僅能對細菌形態觀察。用兩種以上的稱復染,革蘭氏發明了復染色法;先後用兩種染色劑和媒染劑、脫色劑組合,由此而命名為革蘭染色。
革蘭染色不僅可以觀察細菌的形態,同時將細菌分為兩大類。一類是染色陽性菌是紫色,另一類染色陰性的是紅色。
由於細菌的結構上的差異,形成了不同的染色效果。了解染色效能有助於臨床用藥和細菌的鑑定;
如青黴素對革蘭染色陽性菌有效,當化膿性細菌感染可首選藥物。而氟哌酸對革蘭染色陰性桿菌有效,如腸道病、腹瀉為常用藥。
當從尿道培養出革蘭陰性雙球菌,可以作為淋病感染的重要指症。如出現革蘭染色陽性的葡萄球菌,又可作為金黃色葡萄球菌感染依據。
革蘭氏染色法
是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
陽性紫色陰性紅色
未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察
陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明
對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。
原理 通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
致病菌如:
金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌。
百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性。
所以根據細菌的革蘭氏染色性質,可以縮小鑑定範圍,有利於進一步分離鑑定,以對疾病做出診斷。又由於各種抗生素的抗菌譜不同,革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。
實驗方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:
1)塗片固定。
2)草酸銨結晶紫染1分鐘。
3)自來水沖洗。
4)加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。
5)水洗,用吸水紙吸去水分。
6)加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分。
7)蕃紅梁色液(稀)染2分鐘後,自來水沖洗。乾燥,鏡檢。
原理通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
染色結果
革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。
臨床意義
其重要的臨床意義在於:1.鑑別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關::革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同。
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