從什麼可買得到的產品中可以分離出產脂肪酶的微生物

2021-03-03 23:11:04 字數 5133 閱讀 9493

1樓:美涵雅雲

產脂肪酶菌株的篩選

實驗目的:

以橄欖油作為唯一碳源篩選出能產生出脂肪酶的菌株。橄欖油乳化法是測定脂肪酶活性的常用方法,其測定的原理是天然油脂被水解產生的游離脂肪酸可以被氫氧化鈉中和。欖

油乳化:聚丙烯醇3:1橄欖油乳化,水包油型,然後裝在合適的瓶子裡。

實驗原理:

脂肪酶是一類特殊酯鍵水解酶,產脂肪酶的微生物廣泛的分布,主要以各類真菌為主;在富含油脂的地方進行取樣,利用稀釋平板分離法篩選產脂肪酶菌株,再以乳化橄欖油為底物。脂肪酶作用於橄欖油乳化液,催化酯鍵水解,生成脂肪酸,用標準氫氧化鈉滴定脂肪酸,利用酚酞滴定終點,記錄消耗的氫氧化鈉體積,根據氫氧化鈉的用量來計算脂肪酶的活力。

材料:燒杯、玻璃棒、錐形瓶、試管、平板、接種環、製備乳化狀態的針筒等。

土壤採集:

在土門菜市場油汙重地進行土壤取樣。

富集培養基配置:

硫酸銨0.1% 磷酸氫二鉀0.1% 七水硫酸鎂 0.05% 七水硫酸亞鐵0.001% 酵母膏0.5% 橄欖油乳化液12% 氯化鈉l% ph自然,115℃滅菌30min

選擇培養基平板:

乳化橄欖油 12% 蛋白腖 1% 硫酸銨0.2% 磷酸氫二鉀0.1% 磷酸二氫鉀0.

3% 七水硫酸亞鐵0.1% 維多利亞藍0.004% 瓊脂1.

5% ph=8.0滅菌115℃30min 複篩培養基平板:乳化橄欖油

12% 蛋白腖1% 硫酸銨0.2% 磷酸氫二鉀0.1% 磷酸二氫鉀0.3% 七水硫酸亞鐵0.1% 瓊脂1.5% ph=8 115℃滅菌30min

實驗方法:

1、取土樣2g懸無菌水中,**,在100ml培養基中加入5ml的懸液,30℃ 180r/m 培養3d。

2、取富集液稀釋分別塗佈於選擇培養基平板上,經培養觀察菌落周圍的藍色圈,然後挑取

該菌落於富集培養基斜面上。30℃培養箱3d。

3、將初篩得到的菌株在復篩培養基平板劃線,然後放於30℃培養箱中3d。

4、挑取單菌落,鏡檢並純化,得到純菌株儲存。

5、活力測定:u=(v-v.)/t×50×n。6、u=酶活(微摩爾/min)v=樣品耗鹼量(ml),v.=空白

耗鹼量(ml),50=1ml0.05mol/l氫氧化鈉的微摩爾數,t=反應時間(min),n=稀釋倍數

脂肪酶的活力的測定:

1、測定方法很多: 酸鹼滴定法,電位滴定法,濁度測定法,甘油測定法,色譜分析法等。

2、常用的檢測手段為酸鹼滴定,在酸鹼滴定的方法中,有直接進行滴定的,也有先用疏水

有機溶劑抽提出脂肪酸,再進行滴定的。

活性測定選擇時注意:

1、由於反應體系中存在緩衝液的緩衝作用,因此直接滴定法的合理性常令人懷疑,更容易

給科研人員造成困惑,而且直接滴定法的穩定性一般都不十分理想。

2、根據脂肪酸和銅離子形成銅皂的原理利用分光光度法(715nm附近)進行脂肪酶活力的檢測,但是由於實驗中使用大量苯進行銅皂的萃取,容易造成汙染和對人體造成傷害,因此使用該方法的人少。

3、三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作為底物的時候,脂肪酶活力檢測的結果比較穩定,但是

由於三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷**比較昂貴,因此使用的人很少。

4、辛酸對硝基苯酚酷自水解的速度比較快,因此檢測脂肪酶活力的時候,誤差比較大;而乙

酸對硝基苯酚醋水解的速度比較緩慢,因此實驗誤差相對較小,但是辛酸對硝基苯酚醋和乙

酸對硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物,一般認為不適合作為脂肪酶活力檢測的底物,尤

其用乙酸對硝基苯酚酷作為底物,其檢測的活力作為醋酶活力似乎更合理一些。

5、本實驗篩選得到的野生菌株產胞外脂肪酶活性較小,採用將傳統的直接酸鹼滴定法加以

改進的方法來檢測脂肪酶活性。

應用:1、中國食品質量報脂肪酶是酶製劑中的一員,在酒類釀造、蔬菜加工、麵包生產、乳品生產、油脂加工等中應用廣泛,是優良的食品改質劑。

2、該酶能分解各種天然油脂,分解油脂的容易程度為:c18:3>c18:2>c18:1=c16:

0>c18:0>c22:0

分析有關微生物的資料,回答問題並完善實驗設計方案.脂肪酶具有廣泛的應用前景.為獲得高產脂肪酶的菌株

2樓:手機使用者

(1)分離篩選出能分

抄泌脂肪酶的

bai細菌,有要在培養基中加入該du

(4)方案二

(5)b

產脂肪酶菌株的篩選方法有哪些

3樓:槐樹的戀愛

產脂肪酶菌株的篩選

實驗目的:

以橄欖油作為唯一

碳源篩選出能產生出脂肪酶的菌株。橄欖油乳化法是測定脂肪酶活性的常用方法,其測定的原理是天然油脂被水解產生的游離脂肪酸可以被氫氧化鈉中和。欖

油乳化:聚丙烯醇3:1橄欖油乳化,水包油型,然後裝在合適的瓶子裡。

實驗原理:

脂肪酶是一類特殊酯鍵水解酶,產脂肪酶的微生物廣泛的分布,主要以各類真菌為主;在富含油脂的地方進行取樣,利用稀釋平板分離法篩選產脂肪酶菌株,再以乳化橄欖油為底物。脂肪酶作用於橄欖油乳化液,催化酯鍵水解,生成脂肪酸,用標準氫氧化鈉滴定脂肪酸,利用酚酞滴定終點,記錄消耗的氫氧化鈉體積,根據氫氧化鈉的用量來計算脂肪酶的活力。

材料:燒杯、玻璃棒、錐形瓶、試管、平板、接種環、製備乳化狀態的針筒等。

土壤採集:

在土門菜市場油汙重地進行土壤取樣。

富集培養基配置:

硫酸銨0.1% 磷酸氫二鉀0.1% 七水硫酸鎂 0.

05% 七水硫酸亞鐵0.001% 酵母膏0.5% 橄欖油乳化液12% 氯化鈉l% ph自然,115℃滅菌30min

選擇培養基平板:

乳化橄欖油 12% 蛋白腖 1% 硫酸銨0.2% 磷酸氫二鉀0.1% 磷酸二氫鉀0.

3% 七水硫酸亞鐵0.1% 維多利亞藍0.004% 瓊脂1.

5% ph=8.0滅菌115℃30min 複篩培養基平板:乳化橄欖油

12% 蛋白腖1% 硫酸銨0.2% 磷酸氫二鉀0.1% 磷酸二氫鉀0.3% 七水硫酸亞鐵0.1% 瓊脂1.5% ph=8 115℃滅菌30min

實驗方法:

1、取土樣2g懸無菌水中,**,在100ml培養基中加入5ml的懸液,30℃ 180r/m 培養3d。

2、取富集液稀釋分別塗佈於選擇培養基平板上,經培養觀察菌落周圍的藍色圈,然後挑取

該菌落於富集培養基斜面上。30℃培養箱3d。

3、將初篩得到的菌株在復篩培養基平板劃線,然後放於30℃培養箱中3d。

4、挑取單菌落,鏡檢並純化,得到純菌株儲存。

5、活力測定:u=(v-v.)/t×50×n。6、u=酶活(微摩爾/min)v=樣品耗鹼量(ml),v.=空白

耗鹼量(ml),50=1ml0.05mol/l氫氧化鈉的微摩爾數,t=反應時間(min),n=稀釋倍數

脂肪酶的活力的測定:

1、測定方法很多: 酸鹼滴定法,電位滴定法,濁度測定法,甘油測定法,色譜分析法等。

2、常用的檢測手段為酸鹼滴定,在酸鹼滴定的方法中,有直接進行滴定的,也有先用疏水

有機溶劑抽提出脂肪酸,再進行滴定的。

活性測定選擇時注意:

1、由於反應體系中存在緩衝液的緩衝作用,因此直接滴定法的合理性常令人懷疑,更容易

給科研人員造成困惑,而且直接滴定法的穩定性一般都不十分理想。

2、根據脂肪酸和銅離子形成銅皂的原理利用分光光度法(715nm附近)進行脂肪酶活力的檢測,但是由於實驗中使用大量苯進行銅皂的萃取,容易造成汙染和對人體造成傷害,因此使用該方法的人少。

3、三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷作為底物的時候,脂肪酶活力檢測的結果比較穩定,但是

由於三丁酸甘油醋和三油酸甘油酷**比較昂貴,因此使用的人很少。

4、辛酸對硝基苯酚酷自水解的速度比較快,因此檢測脂肪酶活力的時候,誤差比較大;而乙

酸對硝基苯酚醋水解的速度比較緩慢,因此實驗誤差相對較小,但是辛酸對硝基苯酚醋和乙

酸對硝基苯酚醋都不是脂肪酶的天然底物,一般認為不適合作為脂肪酶活力檢測的底物,尤

其用乙酸對硝基苯酚酷作為底物,其檢測的活力作為醋酶活力似乎更合理一些。

5、本實驗篩選得到的野生菌株產胞外脂肪酶活性較小,採用將傳統的直接酸鹼滴定法加以

改進的方法來檢測脂肪酶活性。

應用:1、中國食品質量報脂肪酶是酶製劑中的一員,在酒類釀造、蔬菜加工、麵包生產、乳品生產、油脂加工等中應用廣泛,是優良的食品改質劑。

2、該酶能分解各種天然油脂,分解油脂的容易程度為:c18:3>c18:2>c18:1=c16:

0>c18:0>c22:0

如何從汙水中獲得高產脂肪酶的細菌

4樓:匿名使用者

(1)分離篩選出能分泌脂肪酶的細菌,有要在培養基中加入該特定的碳氮源,而分泌脂肪酶的細菌能在乳糖、酵母膏生長;

(2)產脂肪酶菌株生長的碳源就是蔗糖;

(3)題目要求設濃度梯度的差值為0.2%,要根據這一點來設定;

(4)題目的要求是確定碳氮源濃度的最佳組合,所以在有碳源,又要有氮源.a和b組合後,就是看出碳源在何種濃度、氮源在何種濃度下生長最合適;

(5)abc分別對應交聯法、吸附法、包埋法,包埋法由於需要其活性在固定化處理時不受損失,且在多次重複使用後仍能維持穩定的酶活性.

由微生物發酵得到的產品有哪些?

5樓:匿名使用者

利用微生物發bai酵生產我du們需要的產zhi品,古已有之。2023年前,兩河

dao流域回就有了用大麥

答經微生物發酵生產的含酒精飲料,類似於現在的啤酒。我國也在2000多年前,利用微生物生產了酒類、醬油、醋等產品。此後,酸菜、腐乳、酸奶等也出現了。

到了近現代,隨著對微生物認知程度的提高,微生物發酵為我們提供了更多的產品。

在飲料中,有啤酒、白酒、黃酒、葡萄酒、果酒等。

在食品中,有酸菜、腐乳、酸奶、醬油、醋、味精等。

在化工中,有氨基酸、有機酸、澱粉酶、蛋白酶、木聚醣酶、脂肪酶、乙醇、乙醛、乙酸、丙醇、丙酮、丁醇、甲烷(就是沼氣)、核苷酸……等等。

微生物在醫藥方面的應用屬於現代生物技術。最早是青黴素,此後,各種抗生素層出不窮,多數是用放線菌生產的。還有維生素c、維生素e等。

現在,利用單轉殖抗體生產的干擾素產品也已應用於臨床。用於基因重組技術,將其它生物的基因匯入微生物體內,已生產出了很多原來產量低、提取不易的藥物,如紫杉醇等。

總之,微生物的工業化應用技術是當今發展最快、前景最好的產業之一。

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